Extração e análise de própolis verde de Taiwan
Summary
Apresentamos um protocolo para usar etanol como solvente para extrair e caracterizar taiwanesa própolis verde que apresenta atividade antibacteriana.
Abstract
Própolis verde taiwanesa é rico em flavonoides, composição e apresenta uma ampla gama de atividades biológicas, tais como antioxidante, antibacteriano e uns anticâncer. Os compostos bioativos da própolis verde taiwanesa são propolins, ou seja, C, D, F e G. A concentração de propolins em Taiwan própolis verde varia de acordo com a época e a localização geográfica. Assim, é fundamental estabelecer um procedimento padrão e repetível para determinação da qualidade da própolis verde taiwanesa. Aqui, apresentamos um protocolo que usa etanol extração, cromatografia líquida de alto desempenho e uma análise da atividade antibacteriana para caracterizar a qualidade da própolis verde taiwanesa. Esse método indica que as extrações de etanol 95% e 99,5% alcançar o rendimento máximo de matéria seca de própolis verde taiwanesa, produzindo, assim, as concentrações mais elevadas de propolins que têm propriedades antibacterianas. De acordo com esses achados, o presente protocolo é considerado confiável e reproduzível para determinação da qualidade da própolis verde taiwanesa.
Introduction
Própolis é uma mistura de resina natural produzida pela espécie de abelha Apis mellifera. A própolis tem sido amplamente utilizada desde os tempos antigos em medicamentos de folk. Recentemente, um estudo relatou que a Própolis é benéfico para a prevenção de infecções microbianas e inflamação1. Numerosos estudos têm demonstrado que os principais compostos bioativos na própolis são ésteres de ácidos fenólicos, flavonoides, composição p-cumarínico ácidos e ácidos de diterpenic2,3. Até à data, foram identificados 10 derivados de flavanone composição da própolis verde taiwanesa através de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC)4,5,6,7. O mais abundante entre estes é propolins C, D, F e G5,7. Os efeitos biológicos consideráveis da própolis verde taiwaneses estão correlacionados com seu alto teor de propolins8.
As concentrações de compostos bioativos em Própolis variam muito, dependendo da época e a localização geográfica do que a Própolis é obtida. Própolis Europeu contém principalmente os flavonoides agliconas e fenólicos ácidos9. Os principais compostos bioativos em Própolis do Brasil são de composição p-cumarínico ácidos, tais como o artepillin C10. Um estudo demonstrou que a temporada é um fator crítico na determinação do teor total de propolin em Taiwan própolis verde11. O conteúdo de propolin em Taiwan própolis verde é mais alto no verão (maio – julho) e menor no inverno11. A propriedade anti-bacteriana da própolis tem sido amplamente considerada como um indicador de atividade biológica. Geralmente, as amostras de Própolis coletadas de várias regiões têm exibiu uma propriedade antibacteriana semelhante; por exemplo, é geralmente eficaz contra quase todas as bactérias gram-positivas e exibe um efeito antibacteriano limitado contra bactérias Gram-negativas10,12,13. Interações sinérgicas entre os flavonoides na Própolis foram demonstradas para ter um efeito antibacteriano14. Da mesma forma, própolis verde taiwanesa foi relatado para ter um efeito antimicrobiano contra bactérias gram-positivas,15. Além disso, um estudo identificou também um efeito antimicrobiano de interações de propolins em Taiwan própolis verde8.
A caracterização dos compostos bioativos na Própolis é difícil porque sua composição química pode variar de acordo com sua fonte de origem. Portanto, é necessário estabelecer um método viável e repetível para determinação da qualidade da própolis verde taiwanesa. No entanto, nenhum procedimento padrão foi estabelecido para extração de própolis verde taiwanesa e posterior análise funcional. Foram propostos vários métodos que vària aplicam solventes orgânicos e inorgânicos por Própolis extração16,17,18,19,20. Porque a Própolis é uma mistura lipofílica, estudos têm demonstrado que extração orgânica é melhor do que a extração inorgânicos8,18,19. A concentração total de propolin em Taiwan própolis verde e suas propriedades antibacterianas são indicadores da qualidade da própolis verde taiwanesa. Assim, o objetivo deste estudo é apresentar um protocolo para usando o etanol como solvente para extrair e caracterizar as propriedades antibacterianas da própolis verde taiwanesa.
Protocol
Representative Results
Discussion
Um estudo relatou que a maceração, utilizando diferentes concentrações de etanol, poderia ser usada para extração de Própolis brasileira17; no entanto, o processo foi demorado17. Demorou pelo menos 10 dias para extrair os compostos bioativos, tais como conteúdo fenólico, de Própolis brasileira17. Alternativamente, extração de etanol em combinação com aquecimento a 37 ° C, 50 ° C ou 70 ° C durante 30 min foi proposta para a extração…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este manuscrito foi editado por Wallace edição académica.
Materials
| ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
| Whatman no. 4 filter paper | Sigma-Aldrich | WHA1004125 | |
| methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
| reverse phase RP-18 column | Phenomenex Inc. | 00G-0234-E0 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | BCRC 10780 | |
| Escherichia coli | ATCC | BCRC 10675 | |
| tryptic soy broth | Sigma-Aldrich | 22092 | |
| nutrient broth | Sigma-Aldrich | 70122 | |
| dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| spice grinder | Waring | WSG60K | |
| microplate Reader | Molecular Devices | EMAX PLUS | |
| HPLC system | Agilent | 1200 Series | |
| vacuum evaporation | BÜCHI | Rotavapor R-215 |
References
- Zabaiou, N., et al. Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product. Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).
- Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin. Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).
- Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).
- Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources. Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis. Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).
- Huang, W. J., et al. Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).
- Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis. Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).
- Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).
- Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).
- Chen, Y. W., et al. Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).
- Grange, J. M., Davey, R. W. Antibacterial properties of propolis (bee glue). Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).
- Kujumgiev, A., et al. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins. Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).
- Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus. Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).
- Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).
- Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents. Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).
- Cunha, I. B. S., et al. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).
- Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. Extraction properties of propolis with ethanol concentration. Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).
- Park, Y. K., Ikegaki, M. Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).
- Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity. Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).
- Machado, B. A., et al. Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil. PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).
- Monroy, Y. M., et al. Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water. The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).
- Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan. Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).
- Chen, L. H., et al. Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet. Nutrients. 10 (4), e503 (2018).
