Summary

モルモット モデルにおける心筋傷害の後 - 心筋パッチのこと由来の注入

Published: March 18, 2019
doi:

Summary

ここでモルモット モデルにおける心筋細胞ヒト iPS 細胞由来心筋パッチの注入後、左心室 cryoinjury の誘導のためのプロトコルを提案する.

Abstract

大人の哺乳類中心の限られた再生能力、心筋梗塞は心筋細胞の不可逆的な損失の結果します。この損失心臓の筋肉の量の質量は心不全につながることができます。心臓移植以外にも末期心不全の治療オプションはありません。臓器提供者不足の時代に、器官の独立した治療法が必要です。左心室の補助装置は、ストローク、感染症、出血などの副作用によって制限先療法として特にしかし、有望な治療オプションです。近年では、幹細胞の注入、心臓前駆細胞や心筋のティッシュ エンジニア リングを含むいくつかの心臓の修復戦略を行った。細胞生物学の最近の改善は、大量 (iPSC) ひと誘導多能性幹細胞由来心筋細胞の分化。評価の下で現在心臓の修復戦略の一つ人工心臓組織を移植することです。設計された心臓ティッシュ (EHT) は、ネイティブの中心のティッシュの機能特性との立体生体外で作成された心筋細胞ネットワークです。派生による心筋細胞から EHT パッチを作成しました。ここでモルモット、注入による左心室心筋 cryoinjury の誘導は、左心室壁の EHT を派生プロトコルを提案します。

Introduction

高齢では心不全の患者が増えてきています。末期心不全のため同所性同種心移植、治療のみオプションです。しかし、ヨーロッパ諸国で特に増加の臓器ドナー不足があります。したがって、代替治療法の選択肢が必要です。機械的循環補助の最近の成果は有望であるが、特に長期的に実行、ポンプ血栓症、出血と感染性合併症1のようなその副作用によって制限します。

大人の人間の心の内因性の再生能力は非常に制限されています。したがって、心筋再生療法末期心不全患者2,3のための代替治療オプションになるかもしれない。幹細胞を用いた細胞の注入や組織工学的アプローチがされているを含むさまざまなテクニックは、3,4,5をについて説明します。

ヒト胚性幹細胞 (hESC) と同様に、ひと誘導多能性幹細胞 (こと) を心臓再生の分野で大きな成果となっているひと心筋細胞6が自発的に暴行に効果的に区別できます。療法。

心筋梗塞後心筋を交換して障害のある心臓の機能を向上させるには、心筋細胞および機械的および電気的ネイティブの心と結合の適切な数の生存が不可欠です。ヒト iPS 細胞由来心筋細胞の心筋再生療法の可能性を調べるためには、適切な研究モデルが必要です。理想的なモデルは費用対効果で、人間のような生理学、電気生理学があります。豚のような大動物モデルはその観点から理想的になる、しかし、これらの実験は非常に高価、心筋細胞の大量左心室に及ぼす影響を確認するために関連する心筋細胞数を交換する必要があります。豚梗塞モデルで機能します。

人間の細胞を用いた心筋再生に向けた小学校生物学的質問に答えるなど細胞の生存、血管新生、および電気的結合の小さい動物モデルより適しています。利用可能な小動物モデルからモルモット、ラットとマウスと比較して、最も有用な種人間7の状況によく似ていますその電気生理学。このモルモット モデル左心室の貫壁性 cryoinjury を誘導されます。立体化、心筋梗塞着床誘導後一週間腰細胞由来の心筋細胞を自発的に破ってパッチを行った。心筋細胞の生存は、病理検査で 28 日後を評価しました。

Protocol

動物実験動物の原則のためのガイドに準拠した人道的なケアを受けて、実験動物資源の研究所でを準備、健康の国民の協会によって公開されました。動物のすべてのプロトコルがローカル責任がある権限によって承認された (「Amt こだわり健康を祝して und Verbraucherschutz、ハンザ」/動物プロトコル # 109/16). 1. 動物を入手します。 市販 500-600 g の重量を量る女性のモ…

Representative Results

モルモット EHT パッチによる移植後心筋再生を調査するための適切なモデルです。それは再現性をもって大きい貫壁性心筋傷害をもたらします。瘢痕サイズは 4 週間後 cryoinjury 組織学によって評価されます。メイソン ヒアリン染色貫傷跡 (図 2) を明らかにします。瘢痕サイズ再現性8の高度を反映して負傷した動物の多数に類似していた。平均左室心筋…

Discussion

細胞移植に及ぼす傷害心9,10,11の影響を研究するさまざまな小動物モデルがあります。我々 はすべての小動物のためのモルモット モデル モデル、その (電気) を選んだ生理最も密接に人間のそれに似ています。小動物モデルの利点は、単純な住宅、管理コスト、およびいくつかの労働力です。マウス、ラットと比較してギ?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この研究のための資金だった受信ないです。

Materials

Ventilator (VetFlo Dual Mode) Kent Scientific
Forene abbvie 1000009819
Carprofen Zoetis 256692
Atropin Braun PZN 00648037
Buprenorphin Sigma
Metal stamp
Electric soldering iron Claytools
3-0 prolene suture Ethicon
4-0 prolene suture Ethicon 662SLH
5-0 prolene suture Ethicon 8710H
8-0 prolene suture Ethicon 8841H
Tungsten Carbide Scissor  FST No. 14568-12
Stainless sterilization Container FST No. 20890-51
Graefe Forceps FST No.11652-10
Extra fine Graefe Forceps FST No.11150-10
Forceps FST No. 11022-15
Halsted- Mosquito FST No. 13009-12
Forceps FST No.13003-10
Baby Mixter FST No. 13013-14
Needle holder (Castroviejo with Tungsten Casbide Jaws)  FST No. 12565-14
Needle Holder (Halsey) FST No. 12501-13
Alm Retractor with Blumt Teeth FST No. 17008-07
Spring Scissor FST No. 15000-00
Compress 5×5 Fink + Walter PZN 08821417
Venflon Pro Safety Becton Dickinson PZN11123964
Cautery High Temp 2" Bovie Medical Corporation 0100607151011055

References

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Citer Cet Article
Castro, L., Geertz, B., Reinsch, M., Aksehirlioglu, B., Hansen, A., Eschenhagen, T., Reichenspurner, H., Weinberger, F., Pecha, S. Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model. J. Vis. Exp. (145), e58810, doi:10.3791/58810 (2019).

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