Préparation de rythmiquement actifs In Vitro néonatale rongeurs tronc cérébral-moelle épinière et fine tranche

Samantha B. Palahnuk; Jonathan A. Abdala; Vadim V. Gospodarev; Christopher G. Wilson

doi:10.3791/58870

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Article de méthode

Préparation de rythmiquement actifs In Vitro néonatale rongeurs tronc cérébral-moelle épinière et fine tranche

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DOI :

10.3791/58870

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23 mars 2019

Samantha B. Palahnuk¹^,² , Jonathan A. Abdala¹ , Vadim V. Gospodarev³ , Christopher G. Wilson¹

¹Center for Perinatal Biology, Department of Basic Sciences, Loma Linda University, ²Department of Biology, The College of New Jersey, ³Department of Neurosurgery, Loma Linda University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole tant visuellement communique la préparation du tronc cérébral-moelle épinière et clarifie la préparation des tranches transversale du tronc cérébral d’une façon complète étape par étape. Il a été conçu pour accroître la reproductibilité et la probabilité d’obtenir des tranches viables, durables et rythmiquement actifs pour l’enregistrement de sortie neuronale des régions respiratoires du tronc cérébral.

Résumé

Mammifères rythme inspiratoire est généré à partir un réseau de neurones dans une région du bulbe rachidien appelé la preBötzinger complexe (pBC), produisant un signal conduisant à la contraction rythmique des muscles inspiratoires. Activité neuronale rythmique générée en pBC et transportés aux autres piscines neuronales au lecteur que la musculature de la respiration peut être étudiée en utilisant diverses approches, y compris en bloc nerf enregistrements et tranche transversale. Cependant, méthodes publiées antérieurement n’ont pas largement décrit le processus de dissection du tronc cérébral-moelle épinière de manière transparente et reproductible pour de futures études. Nous présentons ici une vue d’ensemble d’une méthode permettant de façon reproductible couper en tranches de tronc cérébral rythmiquement actifs contenant le circuit neuronal nécessaire et suffisant pour la production et de transmission entraînement inspiratoire. Ce travail s’appuie sur les précédents protocoles d’électrophysiologie de tronc cérébral-moelle épinière pour accroître la probabilité d’obtention fiable des tranches viables et rythmiquement actifs pour l’enregistrement de la sortie neuronale de la pBC, neurones prémoteur hypoglosse (XII pMN), et motoneurones hypoglosse (XII MN). Le travail présenté élargit les précédentes méthodes publiées en fournissant des illustrations détaillées, étape par étapes de la dissection, de chiot tout rat, à in vitro de tranches contenant les radicelles XII.

Introduction

Le réseau de neurones respiratoire du tronc cérébral fournit un domaine fertile pour comprendre les caractéristiques générales des réseaux de neurones rythmiques. En particulier, l’intérêt est dans le développement de rongeurs nouveau-nés respirer et comprendre comment le rythme de la respiration se développe. Cela peut être fait en utilisant une approche à plusieurs niveaux, y compris en pléthysmographie animaux vivo, in vitro en bloc les enregistrements de nerf et in vitro couper les enregistrements qui contiennent le générateur de rythme de respiration. Réductionniste in vitro en bloc et tranche enregistrements constituent une méthode avantageuse à utiliser pour in....