Bleomycin의 내시경 주입에 의한 마우스 폐 손상의 유도
Summary
여기에서 우리는 C57BL에 있는 bleomycin의 내적 주입에 의하여 폐 상해의 유도다음 전체 탯줄에서 장악된 정맥 주입된 인간 중간엽 기질 세포의 항섬유성 활성을 조사하는 효과적인 방법을 제시합니다. /6 마우스. 이 프로토콜은 다른 치료제의 전임상 시험으로 쉽게 확장될 수 있다.
Abstract
폐 섬유증은 다른 병인학을 가진 몇몇 인간적인 폐 질병의 특징입니다. 현재 치료는 오히려 제한되기 때문에, 마우스 모형은 새로운 항섬유성 전략을 개발하기 위한 필수적인 공구가 계속됩니다. 여기서 우리는 전체 탯줄(hUC-MSC)으로부터 수득된 인간 중간엽 기질 세포의 생체 내 항섬유활성을 감쇠하는 블리오마이신 유발 폐 손상을 조사하는 효과적인 방법을 제공한다. C57BL/6 마우스는 블리오마이신(1.5 U/kg 체중)의 단일 endotracheal 주사를 받은 다음, 꼬리 정맥에 hUC-MSC(2.5 x 10 5)를 이중 으로 주입한 후, 24시간 및 7일 후에 블리오마이신 투여 후 7일 후에 투여한다. 8일, 14일 또는 21일에 희생시, 염증 및 섬유성 변화, 콜라겐 함량 및 이식된 폐 조직에서의 hUC-MSC 존재를 분석한다. 마우스 기관에 bleomycin의 주입은 광대한 폐 염증 및 섬유증으로 이끌어 내는 폐의 직접적인 표적으로 허용합니다. hUC-MSC의 이중 투여의 전신 투여는 블리오마이신 유발 폐 손상의 조기 블로닝을 초래한다. 정맥 주입 된 hUC-MSC는 마우스 폐로 일시적으로 이식되어 항 염증 및 항 섬유 활성을 발휘합니다. 결론적으로, 이 프로토콜은 인간 폐 섬유증의 실험마우스 모델에서 hUC-MSC의 전임상 시험을 성공적으로 적용하였다. 그러나, 이 기술은 폐의 병리생리학에 상이한 내측질 투여 물질의 효과를 연구하고 새로운 항염증 및 항섬유성 전신 요법을 검증하기 위해 둘 다 쉽게 확장될 수 있다.
Introduction
폐 섬유증은 세포외 매트릭스 성분의 과도한 침착을 특징으로하는 진보적 인 병리학 적 과정으로, 주로 I 형 콜라겐, 폐 간질에서, 폐 기능 장애를 유발한다. 그것은 다른 병인학을 가진 몇몇 인간적인 폐 질병의 특징이고 나쁜 임상 예후 요인을 나타냅니다. 현재 치료법은 다소제한적이기 때문에 마우스 모델은 질병의 발병 및 진행에 영향을 미치는 병원성 메커니즘의 추가 조사와 새로운 항섬유성 개발을 위한 필수 도구가 되고 있습니다. 전략2,3.
현재까지, 블리오마이신의 투여는 실험적으로 유도된 폐섬유증4의 가장 일반적으로적용된 모델이다. 여러 전달 방법 (정맥 내, 복강 내, 피하 및 흡입 포함) 외에, 출혈 내 또는 안내 주사는 가장 자주 사용되는 경로로 등장했다4,5. 본 명세서에서 설명하는 방법은 기관 점막에 대한 블리오마이신의 스케일링 효과를 피하기 위해 개발되었다. 실제로, 기관을 외부화하고 작동 현미경을 통해 시각화함으로써, 상부 기도에 유출되지 않고 하부 기도로 직접 블레마이신 용액의 전체 부피의 점안을 달성 할 수있다. 필요한 외과 전문 지식과 계측을 사용할 수 있을 때, 이 방법은 아래에 보고된 바와 같이 폐 염증 및 섬유증의 안전하고 견고하며 재현 가능한 유도를 가능하게 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
엔도트라클 투여는 외인성 물질을 폐로 전달하기 위한 우선경로이다. 몇 년 이후, 기관에 bleomycin의 직접 주입은 널리 폐 섬유증을 유도하기 위해 사용되어왔다13, 최근, 더 진보, 비 침습적 기술은이 달성하기 위해 개발되었다14,15 ,16.
여기에 설명된 메서드는 몇 가지 잠재적제한 사항에 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 보조금 RF-2011-02352331 장관 이탈리아어 델라 살루트 (아르만도 가브리엘리)에서 지원되었다.
Materials
| C57BL/6 mice | Charles River | Jax Mice Stock n. 000664 | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | T48402 | |
| Barraquer Micro Needle Holder | Lawton | 62-3755 | |
| Bleomycin sulfate | Sigma-Aldrich | B1141000 | |
| Bürker chamber | Brand | 718905 | |
| Culture Flasks | EuroClone | ET7076 | |
| Disposable razors | Unigloves | 4080 | |
| Dissecting Forceps | Aesculap Surgical Instruments | BD311R | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Heating pad | 2Biological Instruments | 557023 | |
| Isoflurane Vet | Merial Italia | N01AB06 | |
| Operating Microscope | Carl Zeiss | Model OPM 16 | |
| TrypLE Select Enzyme | Gibco | 12563-029 | |
| Vannas Micro Scissors | Aesculap Surgical Instruments | OC498R | |
| Vicryl Plus 4/0 Absorbable Suture, FS-2 needle 19 mm | Ethicon | VCP392ZH |
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