Summary
Klinik Doğrusal Hızlandırıcılar kanser hücrelerinde doz oranlarının geniş bir yelpazede biyolojik etkilerini belirlemek için kullanılabilir. Biz hücre tabanlı deneyleri için doğrusal bir Hızlandırıcı kurmak için nasıl tartışıyoruz ve kanser kök benzeri hücreler için süspansiyon ve hücre hatları yapışkanlık kültürler olarak yetiştirilen içinde tumorspheres olarak yetiştirilen için deneyleri.
Abstract
Radyasyon terapisi kanser yönetiminin temel taşlarından biri olarak kalır. Çoğu kanser için, tümör Hayır için en etkili, cerrahi olmayan tedavi olduğunu. Burada, kanser hücrelerini doğrusal bir Hızlandırıcı ile ışınlamakta bir yöntem tarif ediyoruz. Lineer Hızlandırıcı teknolojisinin ilerlemesi radyasyon tedavisinin hassasiyetini ve verimliliğini artırmıştır. Radyasyon dozları ve doz oranlarının geniş bir biyolojik etkileri araştırma yoğun bir alan olmaya devam ediyor. Doğrusal Hızlandırıcıların kullanımı bu çalışmalar klinik olarak ilgili dozlar ve doz oranları kullanarak kolaylaştırabilir.
Introduction
Radyoterapi birçok kanser türü için etkili bir tedavidir1,2,3,4. Ekstra yüksek doz hızı ışınlama radyasyon tedavisinde nispeten yeni ve Doğrusal Hızlandırıcılar son teknolojik gelişmeler tarafından mümkün hale5. Standart doz oranı ışınlama üzerinde ekstra yüksek doz oranının klinik avantajları kısaltılmış tedavi süresi ve gelişmiş hasta deneyimi içerir. Doğrusal Hızlandırıcılar da hücre kültürü bazlı radyasyon biyoloji çalışmaları için bir klinik ayar sağlar. Radyasyon dozu ve doz oranlarının biyolojik ve terapötik etkileri, radyasyon onkologların ve biyologlar için onlarca yıl6,7,8ilgi odağı olmuştur. Ama, ekstra yüksek doz hızı ışınlama ve flaş ışınlama Radyobiyoloji-radyasyon son derece yüksek doz oranı-henüz iyice incelenmiştir.
Gama ışını ışınlama yaygın hücre kültürü bazlı radyasyon biyoloji kullanılır9,10,11. Radyasyon, radyoaktif izotop kaynaklarından yayılan gama ışınları tarafından elde edilir, genellikle sezyum-137. Radyoaktif kaynakların kullanımı son derece düzenlenmiş ve genellikle kısıtlanmıştır. Kaynak tabanlı ışınlama ile, bu doz oranlarının geniş bir yelpazede test etmek için zor, klinik ulaşılabilir doz oranlarının biyolojik etkileri analizinde onun yarar sınırlama12.
Hem doz ve doz oranı etkilerini gösteren çeşitli çalışmalar olmuştur12,13,14,15,16,17. Bu çalışmalarda, hem radyoaktif izotoplardan oluşturulan gama-ışınlama ya da doğrusal hızlandırıclardan oluşturulan X-ışınları kullanılmıştır. Akciğer kanseri, servikal kanser, glioblastoma ve melanom temsil eden çeşitli hücre hatları kullanılmıştır. Hücre hayatta kalma, hücre döngüsü tutuklama, apoptozis ve DNA hasarı üzerinde radyasyon etkileri okuma olarak değerlendirildi12,13,14,15,16,17 . Burada, doğrusal bir Hızlandırıcı kullanarak X-ışını bazlı radyasyon sağlayarak, klinik olarak ilgili radyasyon dozu ve doz oranlarının biyolojik etkilerini tanımlamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu çalışmalar biyolog, radyasyon onkolog ve tıbbi fizikçi arasında yakın işbirliği ile yapılmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. süspansiyon hücresi kültürü için hücre hazırlığı
- Kök hücre kültürü medyasında kültür glioma kök benzeri hücreler, yaklaşık 5 x 106 hücreli/10 cm 'lik bir hücre kültüründe kuluçer hücrelerinde% 5 Co2, 95% 37 °c ' de bağıl nem.
Not: hücre kültürü koşulu tüm yordamları aynıdır. Protokolde kullanılan medya tam ortamıdır. - Planlanan ışınlanmadan iki gün önce, kültür plakasında, bir kültür kaputu içinde 15 mL santrifüj tüpüne steril 5 mL 'Lik pipet içeren glioma kök benzeri hücreler toplayın.
- 200 x g 'de toplanan hücreleri tezgah santrifüj içinde 3 dakika santrifüjler.
- Süpernatant atın ve hücre peletleri (yaklaşık 1 x 107 hücreler) ile 1 ml Trypsin-EDTA oda sıcaklığında 5 dakika için Trypsin-EDTA tek bir hücre süspansiyon yapmak için sindirin. Nazikçe hücrelerin iyice sindirilmiş emin olmak için sindirim sırasında her 2 dakika Santrifüjlü tüp alt sallayın.
- Tripsin gidermek için 3 mL kök hücre kültürü medya ( malzeme tablosunabakın) ekleyin. 200 x g 'de toplanan hücreleri, sayaç üst santrifüjte 3 dakika santrifüjler. Süpernatant atın ve hücre Pellet kaydedin.
- Hücreleri 5 mL hücre kültürü medyasını ile yeniden resuspend ve bir hemocytometer ile hücreleri saymak.
- Plaka 5 x 106 hücreler 2 10 cm plaka Içeren 10 ml hücre kültürü medya.
- Planlanan ışınlama işleminden hemen önce, 1,3 adımda açıklandığı gibi hücreleri toplayın ve Santrifüjden sonra süpernatant 'ı atın. Hücre kültürü medyasını 5 ml ile Cell Pelet yeniden askıya. 1 mL hücreli süspansiyonu, 2 mL hücre kültürü ortamını içeren 35 mm 'lik bir plakaya aktarın.
Not: Toplam ortam hacmi 35 mm plaka içinde 3 mL, plakadaki sıvı 1 cm yüksekliğindedir. - Plastik veya köpük kutusu gibi ikincil bir konteynerdeki kaplama hücrelerini, kontaminasyon riskini azaltmak ve konteynerdeki hücreleri yardımcı sepetteki ışınlama tesisine getirmek için aktarın.
- 4. adımda açıklandığı gibi hücreleri ışınlanabilir.
2. bağlı hücre kültürü için hücre hazırlığı
- Radyasyondan bir gün önce, hücre kültürü kaputunda, DMEM medyasını bağlı hücre hattının hücre kültürü plakasını çıkarın, örneğin HEK-293 hücreler gibi. Medya, bir vakum ile bağlantılı bir Pasteur pipet kullanılarak alınabilir.
- Kalıntı medyayı durulamak için kültür çanak 5 mL steril PBS ile hücreleri yıkayın.
- Pipet 1 mL tripsin-EDTA kültür çanak içine ve yavaşça tüm çanak Trypsin-EDTA ile kaplıdır emin olmak için kültür plaka eğim.
- Oda sıcaklığında hücreleri tripsinize 5 dk. 3 mL DMEM medya ile tripsin-EDTA reaksiyonu yavaşlatmak ve 5 mL pipet ile hücreleri toplamak 15 mL santrifüj tüp içine kültür kaputu.
- 200 x g 'de toplanan hücreleri, sayaç üst santrifüjte 3 dakika santrifüjler. Süpernatant atın ve hücre Pellet kaydedin.
- Hücreleri 5 mL DMEM medya ile resuspend ve bir hemocytometer ile hücreleri saymak.
- Plaka 2 x 105 hücreler bir 35 mm plaka kullanarak 3 ml hücre kültürü medya yüksekliği 1 cm medya.
- 37 °C ' de kuluçta hücre kültüründen 24 saat sonra, kaplama hücrelerini ikincil bir konteynırda (yani yalıtılmış bir köpük kutusu) bir yardımcı sepetteki ışınlama tesislerine aktarın.
- 4. adımda açıklandığı gibi ırradiate hücreleri.
3. ışınlama sonrasında immünostasyon için hücre hazırlığı
- Bir gecede 4 °C ' de buz üzerinde ticari ekstrellüler protein matrisini çözün. Pre-chill 200 μL pipet uçları ve 1,5 mL Santrifüjü tüpleri gece 4 °C ' de.
- Önceden soğutulmuş pipet uçları ve 1,5 mL santrifüjli borular, tüp başına 200 μL 'de bulunan aliquot ekstrellüler protein matrisidir.
- Seyreltmeli 200 μL 'nin ön soğutulmuş 20 mL hücreli kültür medyasında,% 1 ekstrüselüler protein matrisli medya yapmak için hücre içi protein matrisine sahiptir.
- 35 mm 'lik bir plakaya sterilize edilmiş lamel magazini (22 mm x 22 mm) yerleştirin. 400% 1 hücre içi protein matris medyasını coverslip üzerine yerleştirin.
- 35 mm plakasını 1 saat boyunca 37 °C ' de hücre kültürü kuluçinörüne yerleştirin ve ekstrsellüler protein matrisinin coverslip üzerinde polimerize edilmesini sağlar.
- Askıya alma hücresi kültürü kullanırken, tek bir hücre süspansiyon 1,1 için 1,5 adımları açıklandığı gibi yapın.
- 35 mm plakaya yerleştirilen bir ekstrsellüler protein matris kaplı lamel magazini üzerinde plaka 5 x 104 hücreler. Hücreler protein matris tarafından desteklendiğinden emin olmak için bir gecede hücre kültürü kuluçl kaplama hücreleri dönün. Plakadaki ortamın toplam hacmi, ortamın yüksekliğinin kültür yemeğindeki 1 cm 'ye ulaşmasını sağlamak için 3 mL olmalıdır.
- 10X büyütme objektif lens ile parlak bir alan mikroskop altında hücreleri gözlemlemek. Hücreler yüzen yerine lamel magazini üzerine yayılmalıdır. Bir yardımcı sepeti üzerinde Işınlama tesisi için bir köpük kutusu gibi ikincil bir kap içine kaplama hücreleri ile kültür çanak aktarmak ve adım 4 ' te açıklandığı gibi hücreleri ışınlanması.
- Ekli hücre kültürlerini (örneğin, HEK-293 hücreleri) kullanırken, 2,1 ile 2,6 arasındaki adımlarda açıklandığı gibi Özet hücreler. 5 x 104 hücreleri bir steril kapak kayma üzerinde bir 35 mm plaka bir gün önce radyasyondan emin hücrelerin tam olarak bir mikroskop altında onları gözlemleyerek lamel magazini yüzeye bağlı olmasını sağlamak için adım 3,9. Plaka yüksekliği 1 cm sıvı yapmak için DMEM medya 3 mL kullanın.
- Gece ya da bir gün kadar Cover, hücreleri büyüyen sonra, Işınlama tesisi için ikincil bir kap içinde kaplama hücreleri ile kültür çanak transfer. Bir yardımcı sepeti sızıntının riskini azaltmak için kullanılabilir. 4. adımda açıklandığı gibi ırradiate hücreleri.
4. Lineer Hızlandırıcı (LıNAC) ile ışınlama
- Linac 'ın konsol yazılımını kullanarak Accelerator Portal ve kolimatör 'u 0 ° ' ye ayarlayın, X ve Y çenelerini simetrik 20 X 20 cm2 alan boyutuna açın ve varsa çok yapraklı kolimatörler (mlcs) geri çekin.
Not: LINACs çok yüksek doz hızları sağlayan bir düzleştirme filtresi ücretsiz (FFF) moduna sahip olabilir. Adından da anlaşılacağı gibi, bu radyasyon üniforma değil (düz), ve yüksek doz oranı sadece ışın merkezinde elde edilir. Bu durumda 7 x 7 cm2 alan kullanılır. - Tedavi kanepede en az 5 cm su eşdeğer malzeme yerleştirin. 400 MU/min (Standart doz oranı) üzerine su eşdeğer malzemeye ışınlanmış ve LINAC crosshair 'de merkezi olan hücre çanağını yerleştirin.
- Yaklaşık 1,5 cm, 6 MV X-ışını ışınında maksimum doz derinliğinde ışınlanacak hücreleri yerleştirin. çanak üzerine ek 1 cm su eşdeğer malzeme yerleştirin. Hücrelerde askıya alınan 1 cm orta ile birlikte, bu 1,5 cm ortalama derinlikte hücreleri yerleştirir.
- Ön işaretçiyi LINAC 'ın kafasına yapıştırın. Ön işaretçiyi, birikme malzemesinin yüzeyine temas edene kadar uzatın ve mesafeyi not edin. Kaynaktan birikme yüzeyine uzaklık 100 cm olana kadar tablo yüksekliğini ayarlayın.
Not: mesafe Optik mesafe göstergesi ile teyit edilebilir. Alternatif olarak, Optik mesafe göstergesi kaynağını 100 cm 'ye kadar birikme yüzeyine ayarlamak için ön işaretçinin yerine kullanılabilir. - Hücrelere radyasyon istenilen doz teslim etmek için monitör birimleri (MU) uygun sayısını hesaplayın ve 400 MU/min teslim etmek Hızlandırıcı programı.
Not: maksimum doz derinliğinde 1 cGy/MU teslim etmek için kalibre edilmiş bir LINAC üzerinde yüzey mesafesi (SSD) kurulumu Için, monitör birimlerinin gerekli sayıda MU = doz (cGy)/(1 cGy/MU)/OF (20x20), nereden çıktı faktörü için standları kullanılarak hesaplanır. Bu hesaplamanın, alternatif kalibrasyon kurulumları kullanılarak LINACs için değiştirilmesi gerekir. - Tedavi kasasını bırakın ve diğer tüm bireylerin çıkıldığı doğrulayın. Odada başka hücre olmadığını vrify, ya da radyasyonun düşük dozlarda alacaksınız. Kasa kapısını kapat.
- Konsolda alan boyutunu, MU ve MU/min 'i onaylayın ve ardından ışını etkinleştirin.
- Hücrelerin yüksek veya düşük doz oranlarında ışınlanmış olması için 4.3-4.8 arasındaki adımları yineleyin.
- Hızlandırıcı ile daha yüksek doz oranları (örneğin, 2100 MU/Min veya üzeri) elde etmek için, ters kare yasasına göre hücrelere etkili doz oranını artırmak için SSD 'yi azaltın: Doserateetkili = Doserate * (100 cm/SSD_New)2.
- Düşük doz oranları için (örn., 20 MU/dak), doz oranını azaltmak için kaynağı yüzey mesafesine (SSD_New) yükseltin. Örneğin, hücre kültürü çanak tedavi odasının zemine yerleştirilebilir.
- Bu kurulum gerektiğinde Hızlandırıcı üzerindeki monitör birimi ayarını yeniden hesaplayın, MU = doz (cGy)/(1 cGy/MU)/(20x20)/(100 cm/SSD_New)2kullanarak. MU hesaplamaları hakkında ek bilgi için McDermott ve Orton18' in referansını inceleyin.
- DoseRate tarafından gy/Minute doz oranını belirlemek (GY/min) = doz (GY) * (MU/dak)/mu. Örneğin, 4 Gy 400 MU/min 'de teslim edilen 380 MU, bu yüzden 4 * 400/380 = 4,2 GY/dak. Bkz. Tablo 1.
Şekil 1 : Doğrusal hızlandırıcı üzerinde hücre kültürü çanak kurma. (A) klinik doğrusal Hızlandırıcı gösterilir. (B) tedavi kanepede 5 cm su eşdeğer malzeme yerleştirilir. (C) malzemenin yüzeyine bir hücre kültürü tabağı yerleştirilir. (D) çanak, kare ışık alanı tarafından gösterilen tedavi alanındaki Hızlandırıcı çapraz çizgileri kullanılarak ortalanır. (E) 1 cm su eşdeğer malzeme hücre kültürü çanak üstüne yerleştirilir. Kaynak yüzey mesafesi (SSD), bir Optik mesafe göstergesi (F, G) veya ön Işaretçi (H, ı) kullanılarak denetlenir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
5. radyasyondan sonra biyolojik asder
- Işınlama işleminden sonra, hücreleri hücre kültürü kuluçinörü yukarıda açıklandığı gibi aynı şekilde dönün (adım 1,9, 2,8 ve 3,10).
- Gerektiği gibi, araştırma projesine uyacak şekilde çeşitli biyolojik çözümler terzi.
Not: burada, bir temsili hücre döngüsü analizi16 radyasyon aşağıdaki biyolojik tahlil bir örnek olarak gösterir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Doğrusal bir Hızlandırıcı ile standart doz oranı ve ekstra yüksek doz hızı ışınlama hücre döngüsü etkisini araştırmak için, glioma kök benzeri hücrelerin üç numuneleri bu protokol kullanılarak hazırlanmış ve toplanan 24 saat ışınlama sonra17: bir kontrol örneği ışınlanmış değildi (Şekil 2A), 400 mu/Min ile ışınlanmış bir örnek (monitör ünitesi, 4,2 GY/min standart doz oranı, Şekil 2B) için 4 Gy, ve başka bir örnek ile radyasyonlu 2100 mu/min (21,2 GY/min ekstra yüksek doz oranı, Şekil 2 C) 4 Gy için. Hücre döngüsü profilleri, hücre döngüsünün farklı aşamalarında hücrelerin yüzdeleri ile gösterilir.
Şekil 2 : Doğrusal Hızlandırıcı 4 Gy ışınladıktan sonra hücre döngüsü analizi örneği. G2 hücreli döngü tutuklaması, glioma kök hücrelerinin ışınlandıktan sonra standart doz oranı (400 mu/min) (B) veya ekstra yüksek doz oranı (2100 mu/dak) (C) radyasyon olmayan kontrol hücreleriyle (a) karşılaştırıldığında gözlemlenmiştir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
| DoseRate (MU/MIN) | SSD (CM) | Enerji | MU |
| 20 | 250 | 6X | 2380 * |
| 400 | 100 | 6X | 390 * |
| 2100 | 80 | 6FFF için | 260 * |
Tablo 1: deney kullanılan doz oranları Için kurulum, 4 Gy doz varsayarak. MU diğer gerekli dozlar için doğrusal olarak ölçeklendirilebilir. * Bu kullanılan LINAC için örnek MU vardır. MU yukarıdaki denklem kullanarak kullanıcının özel LıNAC için hesaplanmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Radyoterapi kanser yönetiminin ayrılmaz bir parçasıdır. Devam eden çabaları radyasyon tedavisinin etkinliğini ve verimliliğini artırmak için arama. Doğrusal Hızlandırıcı teknolojisindeki gelişmeler, hastaları görülmemiş doğruluk ve güvenlik ile tedavi etme fırsatı sağlamıştır. Çoğu hastada doğrusal hızlandırıcalardaki yüksek enerji X-ışınları ile tedavi edildiğinden, lineer hızlandırıcılar üzerinde gerçekleştirilen çok çeşitli doz oranlarının biyolojik etkilerini inceleyerek çalışmalar hastalara kolayca uygulanabilir. Radyasyon biyoloji araştırmaları için lineer hızlandırıcılar uygulayarak birkaç rapor olmuştur, ancak sonuçlar karışık ve ek çalışmalar gereklidir13,14,15,16,19.
Doğrusal Hızlandırıcılar göreceli olarak öngörülen doz teslim edildikten sonra hiçbir X-ışınları üretilen olacak anlamda güvenlidir. Radyasyonun sürekli yayıldığı radyoizotopların aksine bu. Dahası, radyasyon teslim etmek için doğrusal Hızlandırıcıların kullanımı, büyük bir doz ve doz oranları yelpazesi ile hedef hacminin şeklini kontrol etmek için sofistike kiriş düzenlemeleri kullanımına izin verir. Bu yöntemin dezavantajı, doğrusal Hızlandırıcı kullanılabilirliği hasta kullanımı nedeniyle sınırlı olabilir ve bu nedenle klinisyenler ve tıbbi fizikçiler ile gelişmiş planlama gerektirir olmasıdır.
Protokolimizde hücrelerde ışınlama için temel prosedürü tarif ediyoruz. Bu yöntem diğer araştırma ihtiyaçlarını karşılamak için uyarlanmış olabilir. Örneğin, kombine kemoterapi ve radyoterapi etkisini araştırmak için ilaç tedavisi ile kombine edilebilir. Bu yöntem, belirli bir hücre hattı veya test radyasyon aşağıdaki uygularken, bazı değişiklikler beklenmelidir. Örneğin, radyasyondan sonra biyomarkerdeki erken değişiklikleri araştırmak için, ışınlandıktan hemen sonra hücreler toplanabilir.
Teslim edilen doz ışın enerjisine bağımlıdır ve yatırılan doz penetrasyon derinliğinin bir fonksiyonu olarak değişir, istenilen doz elde etmek için gereken medya ve su eşdeğer bolus miktarı önemlidir. Yukarıda açıklanan yöntemle, biz tek bir anterior-posterior kiriş 6 MV fotonlar kullanın ve hücre medya kültür çanak yüksekliği 1 cm olduğunu emin olun. Biz hücrelere doz oluşturmak için hücre kültürü çanak üstünde su eşdeğer malzeme ek 1 cm kullanın. Çok yüksek doz oranları elde etmek için, biz hücreleri yerleştirilir hangi kanepe yükseltmek. Çünkü alan boyutu kanepe yükseltilmiş olarak küçük alır, biz bir 35 mm Kültür çanak kullanın ve tüm çanak ışınlama alanı içinde olduğunu emin olun, ışık alanı tarafından sınır. Düşük doz oranları elde etmek için, Biz yüzey mesafesi kaynağını artırmak için odanın katında tedavi kanepe veya yer hücre kültürü çanak aşağı. Daha karmaşık olan hayvanlar için tedavi alanlarının tasarımı, bu makalenin kapsamı dışındadır. Burada açıklanan teknikler, süspansiyon içinde yetiştirilen veya yemeklere bağlı hücre hatları ile biyolojik bulgular için doğrusal bir Hızlandırıcı kullanmayı anlamakta araştırmacılar yardımcı olacaktır. Biyologlar, klinisyenler ve tıbbi fizikçiler arasında yakın işbirliği radyasyon çalışmalarının başarılı bir şekilde yürütülmesi sağlayacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Biz lineer hızlandırıcılar kullanımı için Cleveland Clinic radyasyon Onkoloji Anabilim Dalı teşekkür ederiz. Dr. Jeremy Rich 'e, zengin glioma hücresi gibi hücre hediyesi olarak teşekkür ediyoruz. Bu araştırma Cleveland Clinic tarafından destekleniyordu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material | |||
| glioma stem-like cell 387 | gift from Dr. Jeremy Rich | ||
| 293 cells | ATCC | CRL-1573 | |
| neuron stem cell culture media | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | NeurobasalTM media |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 10569044 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
| Penicillin/Streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15140-122 | |
| Recombinant Human EGF Protein | R&D Systems | 236-EG-01M | |
| Recombinant Human FGF basic | R&D Systems | 4114-TC-01M | |
| B-27™ Supplement | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| Sodium Pyruvate | Thermo Fisher Scientific | 11360070 | |
| L-Glutamine | Thermo Fisher Scientific | 25030164 | |
| Tripsin-EDTA | Thermo Fisher | 25200056 | |
| extracellular proten matrix | Corning | 354277 | MatrigelTM |
| Ethanol | Fisher chemical | A4094 | |
| Equipment | |||
| 10 cm cell culture dish | Denville | T1110 | |
| 3.5 cm cell culture dish | USA Scientific Inc. | CC7682-3340 | |
| 22x22mm glass cover slip | electron microscopy sciences | 72210-10 | |
| 15 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1159M36 | |
| 50 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1158R10 | |
| 5 ml Pipette | Fisher Scientific | 14-955-233 | |
| pipet aid | Fisher Scientific | 13-681-06 | |
| Vortex mixer | Fisher Scientific | 02-215-414 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810R | |
| Linear Accelerator | Varian | n/a | |
| water equivalent material | Sun Nuclear corporation | 557 | Solid waterTM |
| Reagent preparation | |||
| DMEM media | 10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml DMEM media | ||
| stem cell culture media | 10 ml B27 supplement, 20 µg hFGF, 20 µg hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media |
References
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).
- Stupp, R., et al. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial. The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).
- Tao, R., et al. Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).
- Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).
- Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P.
- Hall, E. J. Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy. The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).
- Steel, G. G., et al. The dose-rate effect in human tumour cells. Radiotherapy & Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).
- Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux. Radiotherapy & Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).
- Castro, G., et al. Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease. Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).
- Gaddini, L., et al. Exposing primary rat retina cell cultures to γ-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses. Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).
- Simara, P., et al. DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing. Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 73 (2017).
- Wang, Z., et al. A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells. PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).
- Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival. Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).
- Karan, T., et al. Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams. Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).
- Sarojini, S., et al. A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes. Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).
- Hao, J., et al. The effects of extra high on glioma stem-like cells. PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).
- Liu, J., et al. Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells. International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).
- Mcdermott, P., et al. The Physics and Technology of Radiation Therapy. , Medical Physics Pub Corp. Madison WI. (2010).
- Lohse, I., et al. Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival. Radiotherapy & Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).
