Un modèle murin d’exposition foetale à l’inflammation maternelle pour étudier les effets de la chorioamnionite aiguë sur le développement intestinal nouveau-né

Résumé

Nous avons développé un modèle de chorioamnionite pour simuler l’exposition foetale à l’inflammation maternelle (FEMI) sans complications des organismes vivants pour examiner les effets de FEMI sur le développement du tractus intestinal de la progéniture. Ceci permet l’étude des causes mécanistes pour le développement des dommages intestinaux suivant chorioamnionitis.

Résumé

Chorioamnionitis est un précipité commun de la naissance prématurée et est associé à beaucoup des morbidités de la prématurité, y compris l’entérocolite nécrosante (NEC). Cependant, un lien mécaniste entre ces deux conditions reste à découvrir. Nous avons adopté un modèle murin de chorioamnionitis impliquant l’exposition foetale lipopolysaccharide (LPS)-induite à l’inflammation maternelle (FEMI). Ce modèle de FEMI induit une cascade inflammatoire maternelle, placentaire, et foetale stérile, qui est également présente dans beaucoup de cas de chorioamnionitis clinique. Bien qu’il existe des modèles qui utilisent des bactéries vivantes et imitent plus précisément la pathophysiologie d’une infection ascendante entraînant une chorioamnionite, ces méthodes peuvent causer des effets indirects sur le développement du tractus intestinal immature et du microbiome en développement associé. En utilisant ce protocole, nous avons démontré que l’IGF induite par le SLS entraîne une augmentation dépendante de la dose de la perte de grossesse et de la naissance prématurée, ainsi que la perturbation du développement intestinal normal chez la progéniture. En outre, nous avons démontré que FEMI augmente de manière significative les dommages intestinaux et les cytokines sériques chez la progéniture, tout en diminuant simultanément les cellules de gobelet et de Paneth, qui fournissent toutes deux une première ligne d’immunité innée contre l’inflammation intestinale. Bien qu’un modèle semblable de FEMI LPS-induit ait été employé pour modéliser l’association entre chorioamnionitis et anomalies suivantes du système nerveux central, à notre connaissance, ce protocole est le premier à essayer d’élucider un lien mécaniste entre chorioamnionitis et perturbations plus tard dans le développement intestinal comme lien potentiel entre chorioamnionitis et NEC.

Introduction

Les membranes chorioniques jouent un rôle essentiel dans la grossesse chez les mammifères. Ils comprennent le chorion et l’amnion, qui servent de multiples fonctions. Ils entourent et protègent le foetus, facilitent la signalisation paracrine entre les compartiments maternel et fœtal^1,et créent des boucles de rétroaction locales dans les membranes chorioniques, qui peuvent être impliquées dans l’initiation de la parturition¹. La compréhension actuelle des membranes indique que l’amnion fournit la fonction structurale de barrière, et le chorion fournit un tampon immunologique principalement pour protéger le foetus en déve....

Protocole

Toutes les procédures animales ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Iowa (Protocole #8041401). Tous les animaux étaient logés dans un vivarium approuvé par l’Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AALAC) à l’Université de l’Iowa. Toutes les souris étaient souches sauvages C57Bl/6J.

1. Établissement de femi chez les souris enceintes

1. Préparation LPS
   1. Utilisez le LPS dérivé d’Escherichia coli O55:B5 (concentration de stock 2 mg/mL).
   2. Diluer la concentration de stock de LPS 1:100 avec la solution saline stér....

Résultats

L’exposition à l’IGF le jour embryonnaire 15 entraîne une perte de grossesse dépendante de la dose et un taux dépendant de la dose de travail prématuré (figure 1)⁴². Pour les expériences, nous avons choisi d’utiliser une dose de LPS de 100 μg/kg pour minimiser la perte de grossesse et la prématurité (perte de 50% entre la prématurité et la mort fœtale intra-utérine) tout en exposant les fœtus à une insulte inflammatoire significative.

En ut.......

Discussion

Chorioamnionitis impacts 2\u20124% de terme et 25\u201230% des accouchements prématurés^8,9. Cependant, l’impact de la chorioamnionite peut prolonger la naissance longue après car il a été montré pour avoir des effets significatifs sur le foetus et le^{nouveau-né 10,11,12,13,14,}

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
10 % de formaline neutre tamponnée	Sigma	HT501128
Coloration bleue Alcian	Approvisionnement nouveau venu	1003A
C57Bl6/J souris	Jackson Laboratories	664
Ethanol	Decon labs	2701
HCl	Sigma	H1758
Coloration à l’hématoxyline	Leica	381562
LPS	Sigma	L2880
NaHCO3	Sigma	S6014
Nikon Eclipse Ni-U Microscope	Nikon	2CE-MQVJ-1
Periodic Acid	ACROS	H5106	CAS# 10450-59-9
RNAlater	Thermofisher	Am7021
Réactif de Schiff	Sigma	S5133
Secor Imager 2400	Meso Scale Discovery (MSD)
V-Plex Assay	Meso Scale Discovery (MSD)
Xylene	Sigma	534056