Ампутация нижних конечностей может произойти даже после ангиопластики затрудненных сосудов при критической ишемии конечностей (CLI). Моноядерные клетки-предшественники (MPCs) отражают сосудистый ремонт. В настоящем протоколе описывается количественная оценка МПЦ из циркуляции, близкой к ангиопластике, и его связь с эндотелиальной дисфункцией и прогнозированием ампутации нижних конечностей.
Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой передовую стадию периферического артериального заболевания. Ангиопластика улучшает приток крови к нижней конечности; однако, некоторые пациенты необратимо прогресс к ампутации конечностей. Степень повреждения сосудов и механизмы сосудистого ремонта являются факторами, влияющими на результат постангиопластики. Моноядерные клетки-предшественники (MPC) реагируют на повреждения и ремонт сосудов, с способностью отражать сосудистые заболевания. Настоящий протокол описывает количественную оценку МПЦ, полученных из кровообращения из сосуда вблизи места ангиопластики, а также его связь с эндотелиальной дисфункцией и его прогностический способность к ампутации конечностей в ближайшие 30 дней после ангиопластики у пациентов с CLI.
Периферические артериальные заболевания (ПАД) характеризуются хронической и прогрессирующей сосудистой обструкцией с ограничением кровоснабжения1. В глобальном масштабе, PAD нижних конечностей затрагивает около 10% пожилого населения, в то время как до 7% таких случаев представленыампутации конечностей 2,3.
Критическая ишемия конечностей (CLI) представляет собой наиболее серьезную презентацию PAD1. Пациенты обычно испытывают боль в покое, язвы, или гангрена связано с окклюденых артерий; в то время как клинический прогноз неблагоприятный и характеризуется 30% риск ампутации конечностей и смертности в течение1 года 3,4,5.
Ангиопластика является минимально инвазивной эндоваскулярной процедурой, которая может восстановить приток крови к нижней конечности у пациентов с КЛИ; однако, некоторые пациенты неизбежно потребуется серьезная ампутация конечностей, даже после ангиопластики1,5. Раннее выявление неблагоприятных исходов после ангиопластики является весьма ценным, в связи с возможностью терапии органов.
Традиционные факторы риска могут обеспечить ограниченную прогностический способность для серьезной ампутации конечностей у пациентов с CLI, проходящих ангиопластику6. Патофизиологически-ориентированные биомаркеры представляют собой новые методы с потенциальными клиническими применениями, которые могут привести к особенно полезным при заболеваниях, связанных с сосудистойтравмой 7. В настоящее время участие сотовых популяций, владеющих эндотелиальными ремонтными свойствами, на месте атеросклеротической бляшки, всечаще признается 8,9.
Моноядерные клетки-предшественники (MPC) получены из костного мозга и имеют структурные и функциональные характеристики стволовых клеток с сосудистыми регенеративными способностями. Из-за способности MPC размножаться, мигрировать и проявлять сосудистую приверженность; эти клетки стали хорошими кандидатами, чтобы отразить эндотелиальный ремонт в ответ наишемию 10,11,12. Кроме того, непрерывный интерес к механизмам, лежащим в основе сосудистой травмы побудило изучения прогностический роль местных происходящих биомаркеров, так как они считаются отражением повреждениясосудов и ремонт 7,13,14.
Цель настоящего исследования заключается в том, чтобы описать, как определить количество МПЦ, которые циркулируют близко к сосудистой обструкции у пациентов с КЛИ, проходящих ангиопластику; и как оценить связь между МПЦ с показателями эндотелиальной дисфункции и ампутации конечностей.
По сравнению с прогнозом, основанным на сопутствующих заболеваниях и внутренних сосудистых особенностях, количество местных МЦК показывает специфическую способность прогнозировать клинический исход в отношении эндотелиальной дисфункции и ампутации конечностей. Последовательно, некоторые исследования описали прогностический роль аналогичных биомаркеров во время оценки пациентов с PAD15,16.
На основепредыдущих результатов 7, метод, описанный здесь может быть полезным для раннего выявления населения с риском неблагоприятных сосудистых исходов в нескольких клинических условиях, таких как нижние конечности и ишемической ишемии, инсульт, васкулит, венозный тромбоз и другие, связанные с сосудистой травмы и ремонта.
Сбор крови в точном месте сосудистого блока может показать технические трудности; Поэтому мы проводили сбор крови в непосредственной близости от сосудистого блока. Аналогичным образом, количество MPCs близко к сосудистой бляшки, как представляется, весьма динамичным и может возникнуть …
The authors have nothing to disclose.
Авторы благодарят поддержку Институциональной программы Е015 за проект ID 356.2015.
BSA | Roche | 10735086001 | Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending. |
Calibration Beads | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-607 | MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests |
CD133/1 (AC133)-PE | Milteny Biotec / MACS | #130-080-801 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 | Miltenyi Biotec / MACS | #130-103-798 | Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated |
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-093-601 | Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer |
CD34-FITC | Miltenyi Biotec / MACS | #130-081-001 | The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34 |
CD45- VioBlue | Miltenyi Biotec / MACS | #130-092-880 | Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated |
Conical Tubes | Thermo SCIENTIFIC | #339651 | 15ml conical centrifuge tubes |
Cytometry Tubes | FALCON Corning Brand | #352052 | 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12×75 style. Sterile. |
EDTA | BIO-RAD | #161-0729 | Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe<0.01%, As<1ppm, Insolubles<0.005% |
Improved Neubauer | Without brand | Without catalog number | Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2) |
K2 EDTA Blood Collection Tubes | BD Vacutainer | #367863 | Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL. |
Lymphoprep | Stemcell Technologies | 01-63-12-002-A | Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL |
Paraformaldehyde | SIGMA-ALDRICH | #SZBF0920V | Fixation of biological samples, (powder, 95%) |
Pipette Transfer 1,3mL | CRM Globe | PF1016, PF1015 | The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy. |
Test Tubes | KIMBLE CHASE | 45060 13100 | Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm |