Il mio topo è incinta? Valutazione ecografico ad alta frequenza
Summary
Gli ultrasuoni ad alta risoluzione possono aiutare a semplificare gli esperimenti che richiedono topi in gravidanza a tempo determinando lo stato di gravidanza, l’età gestazionale e le perdite di gravidanza. Presentato qui è un protocollo per illustrare i metodi per valutare le gravidanze del mouse e potenziali insidie (artefatti dell’immagine) che possono imitare la gravidanza.
Abstract
Il topo è il modello animale di mammiferi preferito per molte malattie umane e processi biologici. La biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in vari punti di tempo. Inoltre, l’allevamento ottimale ed efficiente dei topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo. Più comunemente, i topi vengono accoppiati durante la notte e viene determinata la presenza di una spina vaginale; tuttavia, il valore predittivo positivo di questa tecnica è non ottimale e bisogna aspettare per sapere se il topo è veramente incinta. La biomicroscopia ad ultrasuoni ad alta risoluzione è uno strumento efficace ed efficiente per l’imaging: 1) Se un topo è incinta; 2) Quale stadio gestazionale ha raggiunto il topo; e 3) Se ci sono perdite intrauterina. Oltre agli embrioni e ai feti, l’investigatore deve anche riconoscere artefatti comuni nella cavità addominale in modo da non scambiarli per un utero gravide. Questo articolo fornisce un protocollo per l’imaging insieme ad esempi illustrativi.
Introduction
Il topo è il modello di mammifero preferito per molte malattie umane e processibiologici 1,2,3,4. La ricerca in biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in varipunti di tempo 5,6,7,8. Inoltre, l’allevamento ottimale ed efficace di topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo, in particolare quando gli investigatori stanno studiando gli effetti di una mutazione genica sullo sviluppo. In genere, gli investigatori accoppiano topi eterozigoti durante la notte, cercano una spina vaginale la mattina successiva e sperano che ne suscidauna gravidanza 9. Determinare la perdita intrauterina inizia in genere con il controllo di una cucciolata appena nata per i rapporti mendeliani dei genotipi, quindi lavorando all’indietro sacrificando i topi gravidi in varie fasi gestazionali e recuperando gli embrioni. Gli investigatori possono determinare l’aumento di peso come metrica di una gravidanzapositiva 10,11; tuttavia, specialmente con topi geneticamente modificati, le cucciolate possono essere molto piccole e successivamente riassorbiti quando c’è perdita intrauterina a causa della quale l’aumento di peso potrebbe non essere ovvio (in particolare all’inizio della gravidanza, ~ E6.5-8.5). Un topo può apparire falsamente incinta a causa, ad esempio, di un tumore addominale benigno. In sostanza, si lavora “ciechi”.
La biomicroscopia ad ultrasuoni ad alta risoluzione consente la visualizzazione diretta dell’utero gravidato e lo sviluppo di embrioni ditopo 12,13,14,15,16. Sebbene inizialmente avessimo sviluppato metodi per valutare la fisiologia cardiovascolare del topo embrionale16,17, abbiamo riconosciuto l’utilità di questa modalità di imaging per semplificare il nostro allevamento di topi. In particolare, non abbiamo più dovuto aspettare di “vedere” se un topo era incinta, in base all’ovvio aumento di peso o alla consegna di una cucciolata; potremmo determinare lo stato gravid e ri-accoppiare rapidamente i topi se la diga non era incinta. Inoltre, le perdite intrauterina potrebbero anche essere facilmente individuate e una sequenza temporale di perdita potrebbe essere determinata senza sacrificare il mouse (vedi figura 1 per uno schema). Il tempo, i topi modello preziosi e i fondi possono quindi essere risparmiati.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il primo passo più importante nell’imaging è identificare la vagina e quindi determinare la biforcazione del corno uterino a sinistra e a destra. Seguendo ogni corno uterino, è meno probabile che l’imager identifichi erroneamente i loop dell’intestino come utero. Inoltre, comprendere le variazioni nell’aspetto dell’intestino (con /senza materia fecale) è importante per distinguerli dall’utero; occasionalmente, le “palle” fecali negli anelli intestinali possono imitare un utero gravide (incinta). Sebbene altri autori …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
nessuno.
Materials
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
References
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