Методы рассечения и гистологический отбор проб сердца на крупных животных моделях сердечно-сосудистых заболеваний
Summary
Из-за сложной анатомии последовательно воспроизводимый протокол вскрытия и сбора для сердечных образцов может быть сложным для реализации. В этой рукописи представлены ключевые элементы некоторых стандартных протоколов рассечения сердца, подчеркивая как подходы к грубому исследованию, так и участки отбора проб, обычно используемые для гистопатологического исследования.
Abstract
Стандартное грубое обследование и отбор проб являются ключевыми элементами воспроизводимости и успешности экспериментальных исследований сердечно-сосудистых заболеваний, проводимых на крупных животных. Учитывая сложную анатомию сердца, межвидовые различия, типы компенсаторных и патологических реакций, последовательные протоколы сложно реализовать. Использование нескольких протоколов вскрытия обычно адаптируется к опыту прозектора, и личные предпочтения продолжают оставаться источником экспериментальной и межнаблюдательной изменчивости. Здесь цель состоит в том, чтобы представить основные анатомические особенности и ориентиры, протоколы вскрытия и гистологические стандарты отбора проб сердца у некоторых часто используемых видов (включая собак, свиней, жвачных животных и кошек) в качестве моделей сердечно-сосудистых заболеваний.
Здесь представлены два стандартных протокола грубой экспертизы. Во-первых, метод притока-оттока, который следует физиологическому направлению кровотока через сердце и крупные сосуды (часто используется у собак, жвачных животных и свиней), и, во-вторых, метод четырехкамерного рассечения (на примере кошек). Оба метода могут быть адаптированы к любому виду в определенных экспериментальных обстоятельствах. Протоколы отбора проб включают все области, представляющие интерес (синоатриальный узел, желудочки, межжелудочковая перегородка, предсердия, клапаны и аорта), и при правильном проведении улучшают как воспроизводимость, так и надежность экспериментальных исследований.
Introduction
Из-за сложной анатомии и ранней строгости, которые могут мешать оценке толщины сердечной стенки, грубое обследование сердца является сложным и подвержено нескольким ошибкам, связанным с техникой или интерпретацией. Это усиливается межвидовыми морфологическими вариациями и тем, что многие клинические, основные сердечные патологии (включая ранние случаи ишемической болезни сердца, фиброза, артериита и амилоидоза) не связаны с какими-либо грубыми изменениями, являясь, по сути, гистологическими патологиями. Стандартизированный протокол вскрытия и гистологического отбора проб может обеспечить согласованность между наблюдателями и, в то же время, сопоставимость и воспроизводимость экспериментальных исследований сердечно-сосудистых заболеваний.
Образцы были взяты у двух собак (Canis lupus familiaris) (3-летний, самец французского бульдога и 8-летняя самка смешанной породы), кошка (Felis catus) (6-летний, самец европейского короткошерстного), домашняя свинья (Sus scrofa domesticus) (1-летний, самец Большой Белый) и корова (Bos taurus) (2-месячная самка Гольштейна). Каждый из выбранных видов имеет особое применение в качестве сердечно-сосудистой модели для различных заболеваний; например, собаки являются предпочтительной моделью для моделирования аритмии; кошки предпочтительны при гипертрофической кардиомиопатии (ГКМП), так как это вид с наибольшей распространенностью ГКМП; свиньи используются в качестве модели при остром инфаркте миокарда; и жвачные животные используются в качестве модели для интоксикации из-за их воздействия токсинов, которые можно легко найти на лугах11.
В этой рукописи представлены один протокол некропсии и два протокола вскрытия сердца, призванные улучшить грубое и гистологическое исследование сердца при экспериментальных сердечно-сосудистых заболеваниях. Описанные протоколы разработаны на основе информации из ветеринарных учебников 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, журнальной литературы 3,13,14, официальных документов15 и вебинаров16 ,17. Образцы, использованные в этом исследовании, были собраны из трупов, представленных в отделение патологии USAMV Cluj-Napoca для рутинной диагностики вскрытия.
Protocol
Representative Results
Discussion
При выполнении текущего протокола следует тщательно рассмотреть несколько критических шагов для получения последовательных результатов. У молодых животных сердечные измерения отличаются от измерений у взрослых (включая толщину стенки желудочков), и, как правило, сердце представляет…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Никакой.
Materials
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
- Ashworth, M. . Pathology of Heart Disease in the Fetus, Infant and Child: Autopsy, Surgical and Molecular Pathology. , (2019).
- Barone, R., Vigot, . Anatomie Comparée des Mammifères Domestiques: Angiologie. , (2011).
- Basso, C., et al. Guidelines for autopsy investigation of sudden cardiac death: 2017 update from the Association for European Cardiovascular Pathology. Virchows Archiv. 471 (6), 691-705 (2017).
- Bishop, S. P., Fox, P. R., Sisson, D., Moïse, N. S. Chapter 37 – Necropsy Techniques for the Heart and Great Vessels. Textbook of Canine and Feline Cardiology: Principles and Clinical Practice,.2nd ed. , 846-848 (1999).
- Joseph, D. R. The ratio between the heart-weight and body weight in various animals. Journal of Experimental Medicine. 10 (4), 521-522 (1908).
- Keenan, C. M., Vidal, J. D. Standard morphologic evaluation of the heart in the laboratory dog and monkey. Toxicologic Pathology. 34 (1), 67-74 (2006).
- Latimer, H. B. Variability in body and organ weights in the newborn dog and cat compared with that in the adult. The Anatomical Record. 157 (3), 449-456 (1967).
- Lee, J. C., Taylor, F. N., Downing, S. E. A comparison of ventricular weights and geometry in newborn, young, and adult mammals. Journal of Applied Physiology. 38 (1), 147-150 (1975).
- McDonough, S. P., Southard, T. . Necropsy Guide for Dogs, Cats, and Small Mammals. , 9 (2016).
- Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. . Laboratory Methods in Histotechnology. , 29-58 (1992).
- Robinson, W. F., Robinson, N. A., Grant Maxie, M., Saunders, W. B. Chapter 1 – Cardiovascular System. Jubb, Kennedy & Palmer’s Pathology of Domestic Animals, 6th ed. 3, 12-49 (2016).
- Tabaran, A. F. . Autopsie et Medecine Legale: Guide de Travaux Pratiques. , 21-86 (2020).
- . Toxpath.org Available from: https://www.toxpath.org/Trimming-N-Collection-Training.asp (2021)
