Diseksiyon Teknikleri ve Kardiyovasküler Hastalıklar için Büyük Hayvan Modellerinde Kalbin Histolojik Örneklemesi
Summary
Karmaşık anatomi nedeniyle, kardiyak örnekler için sürekli tekrarlanabilir bir diseksiyon ve hasat protokolünün uygulanması zor olabilir. Bu yazıda bazı standart kardiyak diseksiyon protokollerinin temel unsurları sunulmakta ve hem brüt inceleme yaklaşımları hem de histopatolojik inceleme için yaygın olarak kullanılan örnekleme alanları vurgulanmaktadır.
Abstract
Standart brüt muayene ve örnekleme, büyük hayvanlarda yürütülen kardiyovasküler hastalıkların deneysel çalışmalarının tekrarlanabilirliği ve başarısında kilit unsurlardır. Kalbin karmaşık anatomisi, türler arası farklılıklar ve telafi edici ve patolojik reaksiyon türleri göz önüne alındığında, tutarlı protokollerin uygulanması zordur. Çoklu diseksiyon protokollerinin kullanımı genellikle sektörün deneyimine uyacak şekilde uyarlanır ve kişisel tercihler deneysel ve gözlemciler arası değişkenlik kaynağı olmaya devam eder. Burada amaç, kardiyovasküler hastalıkların modelleri olarak yaygın olarak kullanılan bazı türlerde (köpekler, domuzlar, ruminantlar ve kediler dahil) kalbin ana anatomik özelliklerini ve yer işaretlerini, diseksiyon protokollerini ve histolojik örnekleme standartlarını sunmaktır.
Burada iki standart brüt muayene protokolü sunulmaktadır. Birincisi, kalpten ve büyük damarlardan (köpeklerde, ruminantlarda ve domuzlarda sıklıkla kullanılan) fizyolojik kan akış yönünü takip eden giriş-çıkış yöntemi ve ikincisi, dört odacıklı diseksiyon tekniği (kedilerde örneklenmiştir). Her iki teknik de belirli deneysel koşullarda herhangi bir türe uyarlanabilir. Örnekleme protokolleri tüm ilgi alanlarını (sinoatriyal düğüm, ventriküller, interventriküler septum, atriyum, kapakçıklar ve aort) içerir ve uygun şekilde gerçekleştirilirse, deneysel çalışmaların hem tekrarlanabilirliğini hem de güvenilirliğini arttırır.
Introduction
Kardiyak duvar kalınlığının değerlendirilmesine müdahale edebilen karmaşık anatomi ve erken titizlik nedeniyle, kalbin brüt muayenesi zordur ve teknikle ilgili çeşitli veya yorumlama hatalarına eğilimlidir. Bu, interspesifik morfolojik varyasyonlar ve birçok klinik, majör kardiyak patolojinin (erken koroner kalp hastalıkları, fibroz, arterit ve amiloidoz vakaları dahil) özünde histolojik patolojiler olan herhangi bir büyük değişiklikle ilişkili olmadığı gerçeğiyle güçlendirilmiştir. Standartlaştırılmış bir diseksiyon ve histolojik numune toplama protokolü, gözlemciler arasında tutarlılık ve aynı zamanda kardiyovasküler hastalıkların deneysel çalışmalarının karşılaştırılabilirliğini ve tekrarlanabilirliğini sağlayabilir.
Örnekler iki köpekten (Canis lupus familiaris) (3 yaşında, erkek bir Fransız Bulldog ve 8 yaşında, dişi karışık cins), bir kediden (Felis catus) (6 yaşında, erkek bir Avrupa stenografisi), bir evcil domuzdan (Sus scrofa domesticus) (1 yaşında, erkek Büyük Beyaz) ve bir (Bos taurus) (2 aylık, dişi Holstein) toplandı. Seçilen türlerin her biri, farklı bir hastalık için kardiyovasküler bir model olarak özel bir kullanıma sahiptir; örneğin, köpekler aritmi modellemesi için tercih edilen bir modeldir; HCM prevalansının en yüksek olduğu türler olduğu için hipertrofik kardiyomiyopati (HCM) için kediler tercih edilir; domuzlar akut miyokard enfarktüsü için bir model olarak kullanılır; ruminantlar, çayırlarda kolayca bulunabilen toksinlere maruz kalmaları nedeniyle zehirlenme için bir model olarak kullanılır11.
Bu yazıda, deneysel kardiyovasküler hastalıklarda kalbin brüt ve histolojik incelemesini iyileştirmek için tasarlanmış bir nekropsi protokolü ve kalbin iki diseksiyon protokolü sunulmuştur. Açıklanan protokoller, veterinerlik ders kitapları 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, dergi literatürü 3,13,14, resmi belgeler 15 ve web seminerlerinden alınan bilgilere dayanarak geliştirilmiştir 16 ,17. Bu çalışmada kullanılan örnekler, rutin otopsi teşhisi için USAMV Cluj-Napoca Patoloji Bölümü’ne sunulan kadavralardan toplanmıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mevcut protokolü gerçekleştirirken, tutarlı sonuçlar için birkaç kritik adım dikkatlice düşünülmelidir. Genç hayvanlarda, kardiyak ölçümler yetişkinlerdekilerden farklıdır (ventriküler duvar kalınlığı dahil) ve genellikle kalp, vücut ağırlığının daha büyük bir bölümünü temsil eder11,12. Ventriküler hipertrofinin derecesi, genel bir ağırlık formülü uygulanarak, sol ventrikül ile septum arasındaki oran, normal koşullar …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Hiç kimse.
Materials
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
- Ashworth, M. . Pathology of Heart Disease in the Fetus, Infant and Child: Autopsy, Surgical and Molecular Pathology. , (2019).
- Barone, R., Vigot, . Anatomie Comparée des Mammifères Domestiques: Angiologie. , (2011).
- Basso, C., et al. Guidelines for autopsy investigation of sudden cardiac death: 2017 update from the Association for European Cardiovascular Pathology. Virchows Archiv. 471 (6), 691-705 (2017).
- Bishop, S. P., Fox, P. R., Sisson, D., Moïse, N. S. Chapter 37 – Necropsy Techniques for the Heart and Great Vessels. Textbook of Canine and Feline Cardiology: Principles and Clinical Practice,.2nd ed. , 846-848 (1999).
- Joseph, D. R. The ratio between the heart-weight and body weight in various animals. Journal of Experimental Medicine. 10 (4), 521-522 (1908).
- Keenan, C. M., Vidal, J. D. Standard morphologic evaluation of the heart in the laboratory dog and monkey. Toxicologic Pathology. 34 (1), 67-74 (2006).
- Latimer, H. B. Variability in body and organ weights in the newborn dog and cat compared with that in the adult. The Anatomical Record. 157 (3), 449-456 (1967).
- Lee, J. C., Taylor, F. N., Downing, S. E. A comparison of ventricular weights and geometry in newborn, young, and adult mammals. Journal of Applied Physiology. 38 (1), 147-150 (1975).
- McDonough, S. P., Southard, T. . Necropsy Guide for Dogs, Cats, and Small Mammals. , 9 (2016).
- Prophet, E. B., Mills, B., Arrington, J. B., Sobin, L. H. . Laboratory Methods in Histotechnology. , 29-58 (1992).
- Robinson, W. F., Robinson, N. A., Grant Maxie, M., Saunders, W. B. Chapter 1 – Cardiovascular System. Jubb, Kennedy & Palmer’s Pathology of Domestic Animals, 6th ed. 3, 12-49 (2016).
- Tabaran, A. F. . Autopsie et Medecine Legale: Guide de Travaux Pratiques. , 21-86 (2020).
- . Toxpath.org Available from: https://www.toxpath.org/Trimming-N-Collection-Training.asp (2021)
