Summary

विट्रो में मेम्ब्रेन वक्रता संवेदन प्रोटीन के अध्ययन के लिए एक नैनोबार-समर्थित लिपिड बाइलेयर सिस्टम

Published: November 30, 2022
doi:

Summary

यहां, एक नैनोबार-समर्थित लिपिड बाइलेयर सिस्टम को परिभाषित वक्रता के साथ सिंथेटिक झिल्ली प्रदान करने के लिए विकसित किया गया है जो विट्रो में वक्रता संवेदन क्षमता के साथ प्रोटीन के लक्षण वर्णन को सक्षम बनाता है।

Abstract

झिल्ली वक्रता कोशिकाओं की विभिन्न आवश्यक प्रक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है, जैसे कि कोशिका प्रवास, कोशिका विभाजन और पुटिका तस्करी। यह न केवल सेलुलर गतिविधियों द्वारा निष्क्रिय रूप से उत्पन्न होता है, बल्कि सक्रिय रूप से प्रोटीन इंटरैक्शन को भी नियंत्रित करता है और कई इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग में शामिल होता है। इस प्रकार, प्रोटीन और लिपिड के वितरण और गतिशीलता को विनियमित करने में झिल्ली वक्रता की भूमिका की जांच करना बहुत महत्वपूर्ण है। हाल ही में, विट्रो में घुमावदार झिल्ली और प्रोटीन के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए कई तकनीकों का विकास किया गया है। पारंपरिक तकनीकों की तुलना में, नव विकसित नैनोबार-समर्थित लिपिड बाइलेयर (एसएलबी) पूर्व-परिभाषित झिल्ली वक्रता और स्थानीय फ्लैट नियंत्रण के साथ नैनोबार के पैटर्न सरणी पर एक निरंतर लिपिड बाइलेयर बनाकर झिल्ली वक्रता पीढ़ी में उच्च-थ्रूपुट और बेहतर सटीकता दोनों प्रदान करता है। घुमावदार झिल्ली के लिए लिपिड तरलता और प्रोटीन संवेदनशीलता दोनों को प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी इमेजिंग का उपयोग करके मात्रात्मक रूप से विशेषता दी जा सकती है। यहां, नैनोबार सरणियों वाले निर्मित कांच की सतहों पर एसएलबी बनाने और ऐसे एसएलबी पर वक्रता-संवेदनशील प्रोटीन के लक्षण वर्णन पर एक विस्तृत प्रक्रिया पेश की गई है। इसके अलावा, नैनोचिप पुन: उपयोग और छवि प्रसंस्करण के लिए प्रोटोकॉल कवर किए गए हैं। नैनोबार-एसएलबी से परे, यह प्रोटोकॉल वक्रता संवेदन अध्ययन के लिए सभी प्रकार के नैनोस्ट्रक्चर्ड ग्लास चिप्स पर आसानी से लागू होता है।

Introduction

मेम्ब्रेन वक्रता एक कोशिका का एक महत्वपूर्ण भौतिक पैरामीटर है जो विभिन्न सेलुलर प्रक्रियाओं जैसे मॉर्फोजेनेसिस, सेल डिवीजन और सेल माइग्रेशन1 में होता है। अब यह व्यापक रूप से मान्यता प्राप्त है कि झिल्ली वक्रता सेलुलर घटनाओं के एक साधारण परिणाम से परे है; इसके बजाय, यह प्रोटीन इंटरैक्शन और इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग के एक प्रभावी नियामक के रूप में उभरा है। उदाहरण के लिए, क्लैथ्रिन-मध्यस्थता एंडोसाइटोसिस में शामिल कई प्रोटीन अधिमानतः घुमावदार झिल्ली से बंधे हुए पाए गए, जिसके परिणामस्वरूप एंडोसाइटोसिस2 के लिए एक हॉटस्पॉट का गठन हुआ। झिल्ली विरूपण के कई अलग-अलग कारण हैं जैसे साइटोस्केलेटल बलों द्वारा झिल्ली खींचना, विभिन्न आकार के सिर समूहों के साथ लिपिड विषमता की उपस्थिति, शंक्वाकार आकार के साथ ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन का अस्तित्व, बीएआर-डोमेन प्रोटीन (बिन, एम्फीफिसिन और आरवीएस प्रोटीन के नाम पर) जैसे झिल्ली को आकार देने वाले प्रोटीन का संचय, और झिल्ली में एम्फीपैथिक हेलिकॉप्टर डोमेन का सम्मिलन1 . दिलचस्प बात यह है कि ये प्रोटीन और लिपिड न केवल झिल्ली को विकृत करते हैं, बल्कि झिल्ली वक्रता को भी महसूस कर सकते हैं और अधिमान्य संचय प्रदर्शित करसकते हैं। इसलिए, यह अध्ययन करना महत्वपूर्ण है कि क्या और कैसे विभिन्न वक्रता वाले झिल्ली उनसे जुड़े प्रोटीन और लिपिड के वितरण और गतिशीलता को बदलते हैं और संबंधित इंट्रासेल्युलर प्रक्रियाओं पर संभावित प्रभाव डालते हैं।

जीवित कोशिका और इन विट्रो सिस्टम दोनों में घुमावदार झिल्ली और प्रोटीन के बीच बातचीत का विश्लेषण करने के लिए कई तकनीकों को विकसित किया गया है। लाइव सेल सिस्टम समृद्ध लिपिड विविधता और गतिशील प्रोटीन सिग्नलिंग विनियमन 2,3,4,5,6,7 के साथ एक वास्तविक सेल वातावरण प्रदान करता है हालांकि, इंट्रासेल्युलर वातावरण में अनिश्चितताओं और उतार-चढ़ाव के कारण इस तरह की परिष्कृत प्रणाली का अध्ययन करना मुश्किल है। इसलिए, ज्ञात लिपिड प्रजातियों और शुद्ध प्रोटीन से बने कृत्रिम झिल्ली का उपयोग करके इन विट्रो परख प्रोटीन और घुमावदार झिल्ली के बीच संबंधों को चिह्नित करने के लिए शक्तिशाली पुनर्गठन प्रणाली बन गए हैं। परंपरागत रूप से, विभिन्न व्यास के लिपोसोम एक्सट्रूज़न द्वारा उत्पन्न होते हैं ताकि या तो केन्द्रापसारक बल का उपयोग करके सह-अवसादन परख या प्रोटीन एकत्रीकरण 8,9 से बचने के लिए घनत्व ढाल के साथ सह-प्लवनशीलता परख के माध्यम से वक्रता-संवेदनशील प्रोटीन का पता लगाया जा सके। हालांकि, एक्सट्रूडेड लिपोसोम की वक्रता एक्सट्रूडर10 में उपयोग किए जाने वाले झिल्ली फिल्टर के उपलब्ध छिद्र आकार से सीमित है। एकल लिपोसोम वक्रता (एसएलआईसी) परख इस सीमा को दूर करने के लिए साबित हुई है, जिसमें विभिन्न व्यास वाले लिपोसोम को फ्लोरेसेंस-लेबल किया जाता है और सतह पर स्थिर किया जाता है ताकि वक्रता को फ्लोरोसेंट तीव्रता11 द्वारा चिह्नित किया जा सके। हालांकि, छोटे पुटिकाओं में लिपिड संरचना में मजबूत परिवर्तनशीलता देखी गई है, जो वक्रता माप12 की सटीकता को प्रभावित करती है। टीथर-पुलिंग प्रयोग ऑप्टिकल ट्वीज़र का उपयोग करके विशाल यूनिलैमेलर पुटिकाओं (जीयूवी) से खींचे गए क्षणिक टेथर पर वक्रता का अधिक सटीक माप प्रदान करते हैं, जहां वक्रता को13,14 उत्पन्न झिल्ली तनाव द्वारा अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। यह विधि सकारात्मक या नकारात्मक-वक्रता संवेदन प्रोटीन का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है, लेकिन ट्यूब पीढ़ी10 के थ्रूपुट द्वारा बाधित है। समर्थित झिल्ली ट्यूब (एसएमआरटी) परख कई झिल्ली ट्यूबों की एक साथ पीढ़ी को वहन करती है जो माइक्रोफ्लुइडिक प्रवाह द्वारा एक ही लिपिड जलाशय से बाहर निकाले जाते हैं। फिर भी, झिल्ली वक्रता नैनोट्यूब के साथ आंतरिक रूप से भिन्न होती है, जो प्रतिदीप्ति-तीव्रता-आधारित वक्रता माप15,16 की सटीकता से समझौता करती है। इसकी तुलना में, डिजाइन किए गए टोपोग्राफी वाली सतहों पर एक समर्थित लिपिड बाइलेयर (एसएलबी) बनाने के लिए छोटे यूनिलैमेलर पुटिकाओं (एसयूवी, व्यास <100 एनएम 17) का उपयोग करके उच्च सटीकता 18,19,20 में नैनोफैब्रिकेशन या नैनोमैटेरियल्स द्वारा पूर्व निर्धारित वक्रता के साथ एक एकल बाईलेयर झिल्ली उत्पन्न हुई।

यहां, हम नैनोबार सरणियों के साथ निर्मित नैनोचिप सतहों पर एसएलबी के गठन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं और इसका उपयोग विट्रो में प्रोटीन की वक्रता संवेदनशीलता की जांच के लिए कैसे किया जा सकता है। जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, परख के छह आवश्यक घटक हैं: ए) माइक्रोफ्लुइडिक कक्ष के साथ चिप की सफाई और असेंबली; बी) परिभाषित लिपिड संरचना के साथ एसयूवी की तैयारी; सी) नैनोचिप पर एसएलबी का गठन और वक्रता संवेदनशील प्रोटीन के साथ बंधन; डी) प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के तहत एसएलबी और वक्रता संवेदनशील प्रोटीन की इमेजिंग और लक्षण वर्णन; ई) पुन: उपयोग के लिए चिप की सफाई; च) प्रोटीन वक्रता संवेदन क्षमता के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए छवि प्रसंस्करण। विस्तृत प्रोटोकॉल नीचे चरण-दर-चरण वर्णित है।

Protocol

1. नैनोचिप की सफाई नैनोचिप को 10 एमएल बीकर में रखें, जिसमें पैटर्न वाला साइड ऊपर की ओर हो।नोट: यह क्वार्ट्ज नैनोचिप इलेक्ट्रॉन बीम लिथोग्राफी के माध्यम से बनाया गया है जैसा कि21 से प…

Representative Results

सकारात्मक वक्रता संवेदन प्रोटीन की जांच के लिए नैनोबार डिजाइन की सिफारिश की जाती है, जिसमें नैनोबार चौड़ाई द्वारा परिभाषित वक्रता के साथ प्रत्येक छोर पर आधा चक्र होता है और केंद्र में स्थानीय रूप से ए…

Discussion

यहां वर्णित नैनोबार-एसएलबी प्रणाली कई मौजूदा इन विट्रो परखों में फायदे का एक अनूठा संयोजन प्रदान करती है। यह कुशलतापूर्वक लिपोसोम फ्लोटेशन या अवसादन परख के रूप में अत्यधिक घुमावदार झिल्ली के लिए …

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

हम नैनोस्ट्रक्चर फैब्रिकेशन और एसईएम इमेजिंग का समर्थन करने के लिए नानयांग टेक्नोलॉजिकल यूनिवर्सिटी (एनटीयू) में नानयांग नैनोफैब्रिकेशन सेंटर (एन 2 एफसी) और सेंटर फॉर डिसरप्टिव फोटोनिक टेक्नोलॉजीज (सीडीपीटी), प्रोटीन शुद्धिकरण के लिए स्कूल ऑफ बायोलॉजिकल साइंसेज एनटीयू में प्रोटीन प्रोडक्शन प्लेटफॉर्म (पीपीपी) और कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के लिए स्कूल ऑफ केमिकल एंड बायोमेडिकल इंजीनियरिंग एनटीयू को धन्यवाद देते हैं। इस काम को सिंगापुर शिक्षा मंत्रालय (एमओई) (डब्ल्यू झाओ, आरजी 112/20, आरजी 95/21, और एमओई-टी 2ईपी 30220-0009), इंस्टीट्यूट फॉर डिजिटल मॉलिक्यूलर एनालिटिक्स एंड साइंस (आईडीएमएक्सएस) द्वारा वित्त पोषित किया जाता है, जो रिसर्च सेंटर ऑफ एक्सीलेंस स्कीम (डब्ल्यू झाओ), ह्यूमन फ्रंटियर साइंस प्रोग्राम फाउंडेशन (डब्ल्यू झाओ, आरजीवाई0088/2021) के तहत एमओई फंडिंग द्वारा समर्थित है। अनुसंधान छात्रवृत्ति के लिए स्कूल ऑफ केमिकल एंड बायोमेडिकल इंजीनियरिंग एनटीयू (एक्स मियाओ), और अनुसंधान छात्रवृत्ति के लिए चीन छात्रवृत्ति परिषद (जे वू)।

Materials

Anhydrous Ethanol Sigma-Aldrich 100983
Aluminum foil Diamond RN0879999FU
Amber Vial Sigma-Aldrich 27115-U
Brain PS: L-α-phosphatidylserine (Brain, Porcine) (sodium salt) Avanti Polar Lipids, Inc. 840032
10 mL Beaker Schott-Duran SCOT211060804
50 mL Beaker Schott-Duran SCOT211061706
1000 mL Beaker Schott-Duran SCOT211065408 The second container 
Chloroform Sigma-Aldrich V800117
Cotton buds Watsons
18:1 DGS-NTA(Ni): 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-[(N-(5-amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid)succinyl] (nickel salt) Avanti Polar Lipids, Inc. 790404
Egg PC: L-α-phosphatidylcholine (Egg, Chicken) Avanti Polar Lipids, Inc. 840051
F-BAR Protein Production Plaftorm, School of Biological Sciences, Nanyang Technological University, Singapore Proteins and peptide
F-BAR+IDR Protein Production Plaftorm, School of Biological Sciences, Nanyang Technological University, Singapore Proteins and peptide
GFP Protein Production Plaftorm, School of Biological Sciences, Nanyang Technological University, Singapore Proteins and peptide
GFP-His Protein Production Plaftorm, School of Biological Sciences, Nanyang Technological University, Singapore Proteins and peptide
GraphPad Prism GraphPad V9.0.0
Hydrogen Peroxide, 30% (Certified ACS) Thermo Scientific H325-500
IDR from human FBP17 Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
ImageJ National Institutes of Health 1.50d
Laser Scanning Confocal Microscopy Zeiss  LSM 800 with Airyscan 100x (N.A.1.4) oil objective.
Methanol Fisher scientific 10010240
Mini-extuder  Avanti Polar Lipids, Inc. 610000-1EA
1.5 mL Microtubes Greiner 616201
MATLAB Mathworks R2018b
Nuclepore Hydrophilic Membrane,0.1 μm Whatman 800309
Phosphate Bufferen Saline (PBS) Life Technologies Holdings Pte Ltd. 70013
Polydimethylsiloxane (PDMS) Base Dow Corning Corporation SYLGARD 184
Polydimethylsiloxane (PDMS) Crosslinker Dow Corning Corporation SYLGARD 184
Plasma Cleaner HARRICK PLASMA PDC-002-HP
Quartz Nanochip Donghai County Alfa Quartz Products CO., LTD
Sodium Hydroxide  Sigma-Aldrich 795429
Sulfuric acid Sigma-Aldrich 258105
Texas Red DHPE: Texas Red 1,2-Dihexadecanoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine, Triethylammonium Salt Life Technologies Holdings Pte Ltd. T1395MP
Tweezer Gooi PDC-002-HP
Ultrasonic Cleaners Elma D-78224
Voterx Scientific Industries G560E
Vacuum Desiccator NUCERITE 5312
Water Bath Julabo TW8

References

  1. McMahon, H. T., Gallop, J. L. Membrane curvature and mechanisms of dynamic cell membrane remodelling. Nature. 438 (7068), 590-596 (2005).
  2. Zhao, W. et al. Nanoscale manipulation of membrane curvature for probing endocytosis in live cells. Nature Nanotechnology. 12 (8), 750-756 (2017).
  3. Galic, M. et al. External push and internal pull forces recruit curvature-sensing N-BAR domain proteins to the plasma membrane. Nature Cell Biology. 14 (8), 874-881 (2012).
  4. Rosholm, K. R. et al. Membrane curvature regulates ligand-specific membrane sorting of GPCRs in living cells. Nature Chemical Biology. 13 (7), 724-729 (2017).
  5. Lou, H. Y. et al. Membrane curvature underlies actin reorganization in response to nanoscale surface topography. Proceedings of the National Academy of Sciences. 116 (46), 23143-23151 (2019).
  6. Cail, R. C., Shirazinejad, C. R., Drubin, D. G. Induced nanoscale membrane curvature bypasses the essential endocytic function of clathrin. Journal of Cell Biology. 221 (7), e202109013 (2022).
  7. Mu, H. et al. Patterning of oncogenic ras clustering in live cells using vertically aligned nanostructure arrays. Nano Letter. 22 (3), 1007-1016 (2022).
  8. Peter, B. J. et al. BAR domains as sensors of membrane curvature: the amphiphysin BAR structure. Science. 303 (5657), 495-499 (2004).
  9. Bigay, J., Casella, J. F., Drin, G., Mesmin, B., Antonny, B. ArfGAP1 responds to membrane curvature through the folding of a lipid packing sensor motif. The EMBO Journal. 24 (13), 2244-2253 (2005).
  10. Ebrahimkutty, M. P., Galic, M. Receptor-free signaling at curved cellular membranes. Bioessays. 41 (10), e1900068 (2019).
  11. Bhatia, V. K. et al. Amphipathic motifs in BAR domains are essential for membrane curvature sensing. The EMBO Journal. 28 (21), 3303-3314 (2009).
  12. Larsen, J., Hatzakis, N. S., Stamou, D. Observation of inhomogeneity in the lipid composition of individual nanoscale liposomes. Journal of the American Chemical Society. 133 (28), 10685-10687 (2011).
  13. Prevost, C. et al. IRSp53 senses negative membrane curvature and phase separates along membrane tubules. Nature Communications. 6, 8529 (2015).
  14. Simunovic, M. et al. How curvature-generating proteins build scaffolds on membrane nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences. 113 (40), 11226-11231 (2016).
  15. Holkar, S. S., Kamerkar, S. C., Pucadyil, T. J. Spatial control of epsin-induced clathrin assembly by membrane curvature. Journal of Biological Chemistry. 290 (23), 14267-14276 (2015).
  16. Dar, S., Kamerkar, S. C., Pucadyil, T. J. Use of the supported membrane tube assay system for real-time analysis of membrane fission reactions. Nature Protocols. 12 (2), 390-400 (2017).
  17. Nair, P. M., Salaita, K., Petit, R. S., Groves, J. T. Using patterned supported lipid membranes to investigate the role of receptor organization in intercellular signaling. Nature Protocols. 6 (4), 523-539 (2011).
  18. Lee, I. H., Kai, H., Carlson, L. A., Groves, J. T., Hurley, J. H. Negative membrane curvature catalyzes nucleation of endosomal sorting complex required for transport (ESCRT)-III assembly. Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (52), 15892-15897 (2015).
  19. Beber, A. et al. Membrane reshaping by micrometric curvature sensitive septin filaments. Nature Communications. 10 (1), 420 (2019).
  20. Bridges, A. A., Jentzsch, M. S., Oakes, P. W., Occhipinti, P., Gladfelter, A. S. Micron-scale plasma membrane curvature is recognized by the septin cytoskeleton. Journal of Cell Biology. 213 (1), 23-32 (2016).
  21. Li, X. et al. A nanostructure platform for live-cell manipulation of membrane curvature. Nature Protocols. 14 (6), 1772-1802 (2019).
  22. Su, M. et al. Comparative study of curvature sensing mediated by F-BAR and an intrinsically disordered region of FBP17. iScience. 23 (11), 101712 (2020).
  23. Mayer, L. D., Hope, M. J., Cullis, P. R. Vesicles of variable sizes produced by a rapid extrusion procedure. Biochimica et Biophysica Acta. 858 (1), 161-168 (1986).
  24. Santoro, F. et al. Revealing the cell-material interface with nanometer resolution by focused ion beam/scanning electron microscopy. ACS Nano. 11 (8), 8320-8328 (2017).
  25. Platt, V. et al. Influence of multivalent nitrilotriacetic acid lipid-ligand affinity on the circulation half-life in mice of a liposome-attached His6-protein. Bioconjugate Chemistry. 21 (5), 892-902 (2010).
  26. Williams, D., Vicogne, J., Zaitseva, I., McLaughlin, S., Pessin, J. E. Evidence that electrostatic interactions between vesicle-associated membrane protein 2 and acidic phospholipids may modulate the fusion of transport vesicles with the plasma membrane. Molecular Biology of the Cell. 20 (23), 4910-4919 (2009).
  27. El Alaoui, F. et al. Structural organization and dynamics of FCHo2 docking on membranes. Elife. 11, e73156 (2022).
  28. Seu, K. J. et al. Effect of surface treatment on diffusion and domain formation in supported lipid bilayers. Biophysical Journal. 92 (7), 2445-2450 (2007).
  29. Hung, Y. F. et al. Amino terminal region of dengue virus NS4A cytosolic domain binds to highly curved liposomes. Viruses. 7 (7), 4119-4130 (2015).
  30. Hatzakis, N. S. et al. How curved membranes recruit amphipathic helices and protein anchoring motifs. Nature Chemical Biology. 5 (11), 835-841 (2009).
  31. Johnson, J. M., Ha, T., Chu, S., Boxer, S. G. Early steps of supported bilayer formation probed by single vesicle fluorescence assays. Biophysical Journal. 83 (6), 3371-3379 (2002).
  32. Jing, Y., Trefna, H., Persson, M., Kasemo, B., Svedhem, S. Formation of supported lipid bilayers on silica: relation to lipid phase transition temperature and liposome size. Soft Matter. 10 (1), 187-195 (2014).
  33. Cole, R. W., Jinadasa, T., Brown, C. M. Measuring and interpreting point spread functions to determine confocal microscope resolution and ensure quality control. Nature Protocols. 6 (12), 1929-1941 (2011).
  34. Itoh, T. et al. Dynamin and the actin cytoskeleton cooperatively regulate plasma membrane invagination by BAR and F-BAR proteins. Developmental Cell. 9 (6), 791-804 (2005).
  35. Florentsen, C. D. et al. Annexin A4 trimers are recruited by high membrane curvatures in giant plasma membrane vesicles. Soft Matter. 17 (2), 308-318 (2021).
  36. Sarkar, Y., Majumder, R., Das, S., Ray, A., Parui, P. P. Detection of curvature-radius-dependent interfacial pH/polarity for amphiphilic self-assemblies: positive versus negative curvature. Langmuir. 34 (21), 6271-6284 (2018).
  37. Raiborg, C., Stenmark, H. The ESCRT machinery in endosomal sorting of ubiquitylated membrane proteins. Nature. 458 (7237), 445-452 (2009).
  38. Alqabandi, M. et al. The ESCRT-III isoforms CHMP2A and CHMP2B display different effects on membranes upon polymerization. BMC Biology. 19 (1), 66 (2021).
  39. Leitenberger, S. M., Reister-Gottfried, E., Seifert, U. Curvature coupling dependence of membrane protein diffusion coefficients. Langmuir. 24 (4), 1254-1261 (2008).
  40. Bozelli, J. C., Jr. et al. Membrane curvature allosterically regulates the phosphatidylinositol cycle, controlling its rate and acyl-chain composition of its lipid intermediates. Journal of Biological Chemistry. 293 (46), 17780-17791 (2018).
  41. Parthasarathy, R., Yu, C. H., Groves, J. T. Curvature-modulated phase separation in lipid bilayer membranes. Langmuir. 22 (11), 5095-5099 (2006).
  42. Yuan, F. et al. Membrane bending by protein phase separation. Proceedings of the National Academy of Sciences. 118 (11), e2017435118 (2021).
  43. London, E. Membrane structure-function insights from asymmetric lipid vesicles. Accounts of Chemical Research. 52 (8), 2382-2391 (2019).
  44. Rossetti, F. F., Textor, M., Reviakine, I. Asymmetric distribution of phosphatidyl serine in supported phospholipid bilayers on titanium dioxide. Langmuir. 22 (8), 3467-3473 (2006).
  45. Richter, R. P., Maury, N., Brisson, A. R. On the effect of the solid support on the interleaflet distribution of lipids in supported lipid bilayers. Langmuir. 21 (1), 299-304 (2005).
  46. Wacklin, H. P., Thomas, R. K. Spontaneous formation of asymmetric lipid bilayers by adsorption of vesicles. Langmuir. 23 (14), 7644-7651 (2007).
  47. Lin, W. C., Blanchette, C. D., Ratto, T. V., Longo, M. L. Lipid asymmetry in DLPC/DSPC-supported lipid bilayers: a combined AFM and fluorescence microscopy study. Biophysical Journal. 90 (1), 228-237 (2006).
check_url/fr/64340?article_type=t&slug=a-nanobar-supported-lipid-bilayer-system-for-study-membrane-curvature

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Citer Cet Article
Miao, X., Wu, J., Zhao, W. A Nanobar-Supported Lipid Bilayer System for the Study of Membrane Curvature Sensing Proteins in vitro. J. Vis. Exp. (189), e64340, doi:10.3791/64340 (2022).

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