유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양 분석을 위한 고해상도 초음파 검사
Summary
현재 프로토콜은 전체 마우스 갑상선을 시각화하고 역형성 갑상선 암종의 성장을 모니터링하기 위한 고주파 초음파를 설명합니다.
Abstract
역형성 갑상선암(ATC)은 예후가 좋지 않고 생존 기간 중앙값이 짧지만 효과적인 치료법이 결과를 크게 개선하지 않습니다. ATC의 진행을 모방하는 유전자 조작 쥐 모델은 연구자들이 이 질병에 대한 치료법을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 마우스의 세 가지 다른 유전자형을 횡단하는 TPO-cre/ERT2; 브라프CA/wt; Trp53 Δex2-10/Δex2-10 형질전환 ATC 모델이 개발되었습니다. ATC 뮤린 모델은 BrafV600E 의 과발현 및 Trp53의 결실과 함께 타목시펜의 복강내 주사에 의해 유도되었고, 종양은 약 1개월 이내에 생성되었다. 고해상도 초음파를 적용하여 종양 개시 및 진행을 조사하고 종양 크기를 측정하여 동적 성장 곡선을 얻었습니다. 자기 공명 영상 (MRI) 및 컴퓨터 단층 촬영 스캐닝과 비교할 때, 초음파는 비 침습적이고, 휴대가 가능하며, 실시간이며, 방사선 노출없이 ATC 쥐 모델을 관찰하는 데 이점이 있습니다. 고분해능 초음파는 동적 및 다중 측정에 적합합니다. 그러나 생쥐의 갑상선에 대한 초음파 검사에는 관련 해부학 적 지식과 경험이 필요합니다. 이 기사는 형질전환 ATC 모델에서 종양을 스캔하기 위해 고해상도 초음파를 활용하는 자세한 절차를 제공합니다. 한편, 초음파 매개 변수 조정, 초음파 스캐닝 기술, 동물의 마취 및 회복, 그리고 그 과정에서 주의가 필요한 기타 요소가 나열됩니다.
Introduction
역형성 갑상선암(ATC)은 갑상선암의 2% 미만을 차지하지만 매년 갑상선암 관련 사망의 50% 이상을 유발합니다. ATC 진단 후 평균 생존 기간은 약 6개월에 불과하며, 생존율을 유의하게 향상시키는 치료법은 없다 1,2.
ATC의 희귀성은 질병이 어떻게 시작되고 공격적으로 진행되는지를 연구하는 연구를 방해했습니다. 질병을 모방한 유전자 조작 마우스 모델이 최근에 이용 가능해졌으며, 이는 질병과 가능한 치료법에 대한 반응에 대한 통찰력을 제공합니다 3,4,5. 이러한 연구는 측정 및 모니터링을 위한 정확한 종양 영상화를 필요로 하며, 이는 전형적으로 자기 공명 영상, 컴퓨터 단층 촬영 또는 고해상도 초음파를 사용하여 수행된다 6,7. 초음파 검사는 마우스 기관에서 널리 사용되었습니다. 실시간으로 수행 할 수 있고 피사체를 방사선에 노출시키지 않기 때문에 자기 공명 영상 및 컴퓨터 단층 촬영에 비해 장점이 있으며 필요한 장비는 휴대가 가능할 정도로 작습니다 8,9. 그러나 초음파를 사용하여 ATC 성장을 지속적으로 모니터링하는 연구는 드뭅니다. 따라서 이 작업은 이러한 맥락에서 초음파의 유용성을 탐구합니다.
여기서는 ATC의 마우스 모델에서 종양을 정확하게 스캔, 모니터링 및 측정하기 위해 고해상도 초음파를 사용하기 위한 프로토콜이 제시됩니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜은 고해상도 초음파 검사를 사용하여 유전자 조작 마우스 모델에서 동소 ATC 종양을 분석합니다. TPO-cre/ERT2의 유전자형을 가진 형질전환 모델; 브라프CA/wt; Trp53 Δex2-10/Δex2-10은 당사 실험실에서 개발되었습니다. 동물들은 BrafV600E 를 과발현하고 Trp53이 부족합니다. 동물에게 타목시펜을 복강 주사하면 약 1개월 후에 종양 성장이 일어난다<sup class="xre…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 공공, 상업 또는 비영리 자금 지원 기관으로부터 특정 보조금을 받지 못했습니다.
Materials
| Adhesive tape | Winner | ||
| Anesthesia system | RWDlifescience | ||
| Brafflox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Chamber for anesthesia induction | RWDlifescience | ||
| Cotton swabs | Winner | ||
| Depilatory cream | Veet | ||
| Electric heating blanket | Petbee | ||
| Isoflurane vaporizer | RWDlifescience | ||
| Medical gloves | Winner | ||
| Paper towels | Breeze | B914JY | |
| TPO-cre/ERT2 mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Trp53flox/wt mice | Collaboration with Institute of Life Science, eBond Pharmaceutical Technology Ltd, Chengdu, China | ||
| Ultrasound gel | Keppler | KL-250 | |
| Ultrasound machine | VisualSonics | Vevo 3100 |
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