Principes de la recombinase site-spécifique (SSR) Technologie
Summary
L'avènement de la recombinase site-spécifique (SSR) de technologie et le système Cre / lox a conduit à de nombreuses avancées en biologie moléculaire, et s'est avéré un outil précieux pour évaluer la fonction des gènes dans des animaux transgéniques. Cette interview aborde le mécanisme de recombinaison site spécifique par cyclisation recombinase (Cre) et comment l'utilisation de cette enzyme a conduit à l'élaboration de mutagenèse conditionnelle, qui a des avantages significatifs par rapport knock traditionnelle des stratégies.
Abstract
Recombinase site-spécifique (SSR) la technologie permet la manipulation de la structure génétique d'explorer la fonction des gènes et est devenu un outil intégral de la biologie moléculaire. Recombinases site-spécifiques sont des protéines qui se lient à différentes séquences cibles d'ADN. Le système Cre / lox a d'abord été décrite dans les bactériophages durant les années 1980. Recombinase Cre est un type topoisomérase I qui catalyse recombinaison spécifique de site d'ADN entre deux loxP (locus de X-over P1) sites. Le système Cre / lox ne nécessite aucune cofacteurs. Séquences LoxP contiennent distinctes sites de liaison pour les recombinases Cre qui entourent une séquence centrale directionnelle, où la recombinaison et le réarrangement a lieu. Lorsque les cellules contiennent des sites loxP et expriment la recombinase Cre, un événement de recombinaison se produit. ADN double-brin est coupé à deux sites loxP par la recombinase Cre, réarrangés, et ligaturé ("ciseaux et de colle»). Produits de l'événement de recombinaison dépendent de l'orientation relative des séquences asymétriques.
La technologie RSS est souvent utilisé comme un outil pour explorer la fonction des gènes. Ici, le gène d'intérêt est flanquée de Cre cible loxP sites ("floxés"). Les animaux sont ensuite croisés avec des animaux exprimant la recombinase Cre sous le contrôle d'un promoteur tissu-spécifique. Dans les tissus qui expriment la recombinase Cre il se lie à des séquences cibles et accises du gène floxés. Délétion du gène contrôlé permet à l'enquête sur la fonction des gènes dans les tissus spécifiques et à des moments distincts. Analyse de la fonction génique utilisant la technologie SSR — mutagenèse conditionnelle – a des avantages significatifs par rapport traditionnelle knock-outs, où une délétion du gène est fréquemment mortelle.
