Immunoblot analyse

Summary

Immunoblotting (western blotting) is een snelle en gevoelige test voor de detectie en karakterisering van eiwitten die werkt door het benutten van de specificiteit die inherent zijn aan antigeen-antilichaam erkenning. Deze video bevat protocollen voor de scheiding van eiwitten, blotting eiwitten op membranen, immunoprobing, en visualisatie met behulp van chromogene of chemiluminescent substraten.

Abstract

Immunoblotting (western blotting) is een snelle en gevoelige test voor de detectie en karakterisering van eiwitten die werkt door het benutten van de specificiteit die inherent zijn aan antigeen-antilichaam erkenning. Het gaat om de solubilisatie en de elektroforetische scheiding van eiwitten, glycoproteïnen, of lipopolysacchariden door gelelektroforese, gevolgd door kwantitatieve overdracht en onomkeerbare binding aan nitrocellulose, PVDF, of nylon. De immunoblotting techniek is nuttig in het identificeren van specifieke antigenen herkend door polyklonale of monoklonale antistoffen en is zeer gevoelig (1 ng van het antigeen kan worden opgespoord). Dit apparaat biedt protocollen voor scheiding van eiwitten, blotting eiwitten op membranen, immunoprobing, en visualisatie met behulp van chromogene of chemiluminescent substraten.

Protocol

De volledige tekst protocol voor deze experimentele aanpak is beschikbaar in Current Protocols in Molecular Biology