Electroporación de micobacterias

Summary

Estrategias de micobacterias patógenas siguen siendo poco conocidos. El lento crecimiento de la mayoría de las especies, la naturaleza impenetrable de la pared celular, y los riesgos de trabajar con agentes patógenos que las micobacterias difíciles de estudiar y son en gran parte responsable de nuestro pobre entendimiento de estos organismos. En este video vamos a demostrar la técnica de la electroporación, que consiste en someter las células a un breve impulso eléctrico de alta para permitir la entrada de ADN. Es el método más ampliamente utilizado para la introducción de ADN en las células de la micobacteria.

Abstract

Transformación de alta eficiencia es una limitación importante en el estudio de las micobacterias. El género Mycobacterium pueden ser difíciles de transformar, lo que es causada principalmente por la pared celular gruesa y cerosa, pero se ve agravado por el hecho de que la mayoría de las técnicas moleculares han sido desarrollados para especies poco relacionadas, tales como Escherichia coli y Bacillus subtilis. A pesar de estos obstáculos, los plásmidos de micobacterias han sido identificados y la transformación del ADN de muchas especies de micobacterias han sido descritas. El método más exitoso para la introducción de ADN en las micobacterias es la electroporación. Muchos parámetros de contribuir a la transformación exitosa, que incluyen la especie / variedad, la naturaleza de la transformación de ADN, el marcador de selección utilizado, el medio de cultivo y las condiciones para el impulso de la electroporación. Métodos optimizados para la transformación tanto de lento y rápido cultivadores se detallan aquí. Eficiencia de transformación para las diferentes especies de micobacterias, y con varios marcadores de selección se informó.