الجزيئية تطور Recombinase تري

Summary

نحن هنا تقرير من الجيل recombinase تري من خلال التطور ، وجهت الجزيئية. TRE recombinase تعترف تسلسل هدف محدد مسبقا ضمن تسلسل LTR للطليعة الفيروس HIV – 1 ، مما أسفر عن ختان البنات والقضاء على طليعة الفيروس من خلايا بشرية مصابة. في حين لا يزال في مراحله الأولى ، والتطور الجزيئي الموجه تسمح بإنشاء الأنزيمات المخصصة التي ستكون بمثابة أدوات جراحة الجزيئية والطب الجزيئي.

Abstract

نحن هنا تقرير من الجيل recombinase تري من خلال التطور ، وجهت الجزيئية. TRE recombinase تعترف تسلسل هدف محدد مسبقا ضمن تسلسل LTR للطليعة الفيروس HIV – 1 ، مما أسفر عن ختان البنات والقضاء على طليعة الفيروس من خلايا بشرية مصابة.

بدأنا مع لجنة المساواة العرقية ، وهو 38 كيلو دالتون recombinase ، أن تعترف 34 سنة مضت تسلسل الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل المعروفة باسم loxP. لجنة المساواة العرقية يمكن القضاء على نحو فعال تسلسل الجينوم ، شرعنا في خياط recombinase التي يمكن إزالة تسلسل بين LTR – 5' – LTR و3' من طليعة الفيروس HIV – 1 متكاملة. كخطوة أولى ضمن تسلسل حددنا مواقع LTR التي كانت مشابهة لloxP واختبارها لنشاط إعادة التركيب. فشلت لجنة المساواة العرقية في البداية والمكتبات mutagenized لجنة المساواة العرقية لإعادة تجميع المواقع loxLTR المختار من طليعة الفيروس HIV – 1. كما تبدأ في أي عملية التطور الجزيئي الموجه يتطلب ما لا يقل عن النشاط المتبقية ، تم تقسيم الأصلي متواليات loxLTR غير المتناظر إلى مجموعات فرعية واختبارها مرة أخرى لنشاط إعادة التركيب. بصفتها وسيطة ، وظهر نشاط إعادة التركيب مع مجموعات فرعية. وقد أثرى المقبل ، من خلال دورات المكتبات recombinase تطور يتكرر. في وقت لاحق ، تم تعديلا المكتبات المخصب ومعاد. أثبتت مجموعة من الطفرات والتآزر مختلفة تم إنشاؤها recombinases التي كانت قادرة على إعادة تجميع وloxLTR1 loxLTR2. كان هذا دليلا على أن استراتيجية التطور من خلال وسيطة يمكن أن تكون ناجحة. بعد ما مجموعه 126 دورات التطور وظيفيا وبنيويا تحليل recombinases الفردية. وكان 19 من الأحماض الأمينية التغييرات بالمقارنة مع لجنة المساواة العرقية — وهو الأكثر نشاطا recombinase — تري. وتري recombinase قادرة على استئصال طليعة الفيروس HIV – 1 من الجينوم HIV – 1 بالعدوى خلايا هيلا (انظر "HIV – 1 الحمض النووي الختان Proviral باستخدام Recombinase تطورت" ، Hauber J. ، هاينريش Pette ، معهد علم الفيروسات التجريبي وعلم المناعة ، هامبورغ ، ألمانيا). في حين لا يزال في مراحله الأولى ، والتطور الجزيئي الموجه تسمح بإنشاء الأنزيمات المخصصة التي ستكون بمثابة أدوات "جراحة الجزيئي" ، والطب الجزيئي.