Primaire los middenhersenen Dopamine celculturen van knaagdieren pasgeborenen

Summary

Primaire los middenhersenen dopamine celculturen zorgen voor de studie van de presynaptische kenmerken van dopamine neuronen. Ze kunnen worden gebruikt om real-time dopamine-afgifte kinetiek en een eiwitfractie / mRNA niveaus van de regulatoren van dopamine exocytose monitor. Hier tonen we u hoe u deze culturen genereren uit knaagdier pasgeborenen.

Abstract

De mogelijkheid om primaire celculturen van dopamine neuronen te creëren zorgt voor de studie van de presynaptische kenmerken van dopamine neuronen geïsoleerd van de systemische input van elders in de hersenen. In ons lab, gebruiken we deze neuronen aan dopamine vrijgavekinetiek met behulp van koolstof vezel amperometrie, alsook expressie van dopamine verwante genen en eiwitten met behulp van kwantitatieve PCR en immunocytochemie te beoordelen. In deze video laten we u zien hoe we deze culturen genereren op basis van knaagdieren pasgeborenen.

Het proces omvat een aantal stappen, waaronder de beplating van de corticale gliale astrocyten, de conditionering van neuronale cel-cultuur media door de gliale substraat, de ontleding van de middenhersenen bij pasgeborenen, de spijsvertering, extractie en plating van dopamine neuronen en de toevoeging van neurotrofe factoren om zorgen voor overleving van de cel.

De applicaties die geschikt zijn voor een dergelijk preparaat onder de elektrofysiologie, immunocytochemie, kwantitatieve PCR, video microscopie (dat wil zeggen, van real-time vesiculaire fusie met de plasmamembraan), levensvatbaarheid van de cellen assays en andere toxicologische schermen.

Protocol

Voorbereiding Voorafgaand aan de Cultuur Let op: ** gliacellen moeten goed worden uitgeplaat op voorhand, zodat ze tijd hebben om te woekeren en bedek de bodem van de gerechten. Voor muizen met atypische of experimentele genetische achtergrond, zorg ervoor om gliale en neuronale culturen wedstrijd in termen van genotype. Let op: ** 1-7 dagen vóór versnijding, bereiden verse neuronale medium en vervang de gliale medium in de gerechten met 2ml. </…

Discussion

De hier beschreven methoden zorgen voor prima resolutie van morfologische en neurochemische kenmerken van centrale dopamine neuronen die anders niet beschikbaar zijn in een systemische of in vivo benadering.

Materials

Materials are included in the protocol text.