نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يبدأ الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة سطر من الأسهم المجمدة.
Abstract
نحن هنا لشرح كيفية مختبرنا يبدأ الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة سطر من الأسهم المجمدة. أولا ، يتم شطف a 1-2 اليوم وحة الطول العمر عشرة من واحد تقريبا (لاثنين) مليون المشع الليفية التغذية الماوس الجنينية خلايا الاشكال مع وسائل الاعلام لازالة الحطام وبقايا مصل الخلية ، ثم الأشكال وسائل الاعلام واليسار وأضاف أن يوازن في الخلية الثقافة الحاضنة. هو مصدر المجمدة قارورة من الخلايا على المدى الطويل من تخزين النتروجين السائل أو المجمد A – 80C وسرعان ما غرقت في حمام مائي 37C لذوبان سريع. ثم تتم إزالة الخلايا في وسائل الاعلام من تجميد القارورة ووضعها في مجلد كبير من وسائل الاعلام الأشكال. حجم كبير من الأشكال وسائل الاعلام المصل يسهل إزالة الزائدة وDMSO ، والتي يمكن أن تسبب الأشكال الخلايا الجذعية الجنينية البشرية للتمييز. هي نسج الخلايا برفق من التعليق ، ومن ثم إعادة معلقة في حجم صغير وسائل الاعلام الأشكال الجديدة التي يتم استخدامها بعد ذلك إلى البذور لوحة MEF. ويعتبر أن من المهم أن البذور لوحة MEF بإضافة بلطف خلايا الأشكال بطريقة حكيمة لتفريق قطرة بالتساوي لهم في جميع أنحاء اللوحة. يتم إرجاع الثقافة الأشكال التي أنشئت حديثا لوحة إلى حاضنة لمدة 48 ساعة قبل أن يتم استبدال وسائل الإعلام ، ثم يتم تغذية كل 24 ساعة بعد ذلك.
Protocol
ذوبان الجليد من الأسهم المجمدة : قبل ذوبان الأشكال الخلايا ، وضمان مطلي بشكل صحيح لوحة MEF لديك بالفعل وعلى استعداد في حالة جيدة. DO NOT محاولة استخدام لوحة أقل من المرغوب فيه ، أو واحد ه…
Discussion
في هذا الفيديو ، وتبين لنا كيف يحدد المختبر لدينا بشكل روتيني الأشكال الجذعية الجنينية البشرية خلية ثقافة من الأسهم المجمدة. هذه العملية هي قابلة للاستخدام العام مع أي خلايا الثدييات إذا المجمدة في حل DMSO. ذوبان كفاءة أمر ضروري لإرساء ثقافة جديدة من الخلايا الأشكال من الأسهم الم…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
HuES media 651.5 ml
KO-DMEM 500 ml
PenStrep 6.5 ml
Glutamin 6.5 ml
NEAA 6.5 ml
beta-mercaptoethanol 0.5ul
KO Serum Replacement 65 ml
Plasmanate 65 ml
bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml