ЭС клетки человека: начиная культуры из замороженных клеток

Summary

Здесь показано, как в нашей лаборатории начинается оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеточной линии культуры из замороженного запаса.

Abstract

Здесь показано, как в нашей лаборатории начинается оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеточной линии культуры из замороженного запаса. Во-первых, 1:59 дневных десять см пластины приблизительно один (два) миллиона облученных мышиных эмбриональных фибробластов фидерные клетки промывают оттенков СМИ, чтобы удалить остатки сыворотки и сотовых мусора, а затем добавил оттенки СМИ и оставил, чтобы уравновесить в клетке культуры инкубатора. Замороженный флакон клеток от долгосрочного хранения в жидком азоте или-80C морозильник был добыт и быстро погружается в ванну воды 37С для быстрого оттаивания. Ячейки в замораживании средств массовой информации удаляют из флакона и помещен в большом объеме оттенков СМИ. Большой объем оттенков СМИ облегчает удаление лишней сыворотки и ДМСО, который может вызвать оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеток дифференцироваться. Клетки осторожно вышла из-под подвеску, а затем вновь приостановлено в небольшом объеме свежих СМИ оттенков, которые затем используются для семян MEF пластины. Это считается важным для семян MEF пластину, осторожно добавить оттенки клетки в капле мудрый модой чтобы равномерно рассредоточить их по всему пластины. Вновь созданных оттенков культуры пластина возвращается в инкубаторе в течение 48 часов до средств массовой информации заменяется, а затем подается каждые 24 часа после этого.

Protocol

Оттепель из замороженных складе: Перед оттаиванием оттенков клетки, убедитесь, что пластины MEF вы уже подготовили должным образом покрытие в хорошем состоянии. НЕ пытайтесь использовать меньше, чем желательно пластинку, или тот, который старше,…

Discussion

В этом видеоролике мы покажем, как наша лаборатория регулярно устанавливает оттенки человеческих стволовых эмбриональных клеточных культур из замороженного запаса. Этот процесс поддается для общего использования с любыми клетка млекопитающего, если замороженные в растворе ДМСО. Эффективное о?…

Materials

HuES media 651.5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml Glutamin 6.5 ml NEAA 6.5 ml beta-mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml