Здесь показано, как в нашей лаборатории начинается оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеточной линии культуры из замороженного запаса.
Abstract
Здесь показано, как в нашей лаборатории начинается оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеточной линии культуры из замороженного запаса. Во-первых, 1:59 дневных десять см пластины приблизительно один (два) миллиона облученных мышиных эмбриональных фибробластов фидерные клетки промывают оттенков СМИ, чтобы удалить остатки сыворотки и сотовых мусора, а затем добавил оттенки СМИ и оставил, чтобы уравновесить в клетке культуры инкубатора. Замороженный флакон клеток от долгосрочного хранения в жидком азоте или-80C морозильник был добыт и быстро погружается в ванну воды 37С для быстрого оттаивания. Ячейки в замораживании средств массовой информации удаляют из флакона и помещен в большом объеме оттенков СМИ. Большой объем оттенков СМИ облегчает удаление лишней сыворотки и ДМСО, который может вызвать оттенки человеческих эмбриональных стволовых клеток дифференцироваться. Клетки осторожно вышла из-под подвеску, а затем вновь приостановлено в небольшом объеме свежих СМИ оттенков, которые затем используются для семян MEF пластины. Это считается важным для семян MEF пластину, осторожно добавить оттенки клетки в капле мудрый модой чтобы равномерно рассредоточить их по всему пластины. Вновь созданных оттенков культуры пластина возвращается в инкубаторе в течение 48 часов до средств массовой информации заменяется, а затем подается каждые 24 часа после этого.
Protocol
Оттепель из замороженных складе: Перед оттаиванием оттенков клетки, убедитесь, что пластины MEF вы уже подготовили должным образом покрытие в хорошем состоянии. НЕ пытайтесь использовать меньше, чем желательно пластинку, или тот, который старше,…
Discussion
В этом видеоролике мы покажем, как наша лаборатория регулярно устанавливает оттенки человеческих стволовых эмбриональных клеточных культур из замороженного запаса. Этот процесс поддается для общего использования с любыми клетка млекопитающего, если замороженные в растворе ДМСО. Эффективное о?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
HuES media 651.5 ml
KO-DMEM 500 ml
PenStrep 6.5 ml
Glutamin 6.5 ml
NEAA 6.5 ml
beta-mercaptoethanol 0.5ul
KO Serum Replacement 65 ml
Plasmanate 65 ml
bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml