जमे हुए कक्ष से शुरू संस्कृति: मानव ES कोशिकाओं
Summary
यहाँ हम का प्रदर्शन कैसे हमारी प्रयोगशाला एक जमे हुए स्टॉक से एक रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइन संस्कृति शुरू होता है.
Abstract
यहाँ हम का प्रदर्शन कैसे हमारी प्रयोगशाला एक जमे हुए स्टॉक से एक रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइन संस्कृति शुरू होता है. सबसे पहले, एक से दो दिन पुरानी दस लगभग एक सेमी प्लेट (दो) मिलियन विकिरणित माउस भ्रूण fibroblast फीडर कोशिकाओं hues मीडिया के साथ rinsed है अवशिष्ट सीरम और सेल मलबे को हटाने, और तब रंग मीडिया जोड़ा और सेल में संतुलित करने के लिए छोड़ दिया इनक्यूबेटर संस्कृति. लंबी अवधि तरल नाइट्रोजन भंडारण या एक 80C फ्रीजर से कोशिकाओं के एक जमे हुए शीशी sourced है और जल्दी से जल्दी विगलन के लिए एक 37C पानी के स्नान में जलमग्न. ठंड मीडिया में कक्ष तब शीशी से हटा रहे हैं और रंग मीडिया की एक बड़ी मात्रा में रखा है. रंग की बड़ी मात्रा में मीडिया अतिरिक्त सीरम और DMSO के हटाने है, जो रंग मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं को अलग करने के लिए पैदा कर सकता है सुविधा. कक्ष निलंबन की धीरे बाहर काता, और तब फिर से ताजा hues मीडिया है कि तब MEF थाली बीज के लिए प्रयोग किया जाता है की एक छोटी मात्रा में निलंबित कर दिया. यह MEF थाली बीज के लिए महत्वपूर्ण धीरे एक बूंद बुद्धिमान फैशन में रंग कोशिकाओं को जोड़ने के लिए समान रूप से उन्हें थाली भर में फैलाने के द्वारा माना जाता है. 48 घंटे के लिए नव स्थापित hues संस्कृति थाली इनक्यूबेटर में लौट रहा है पहले मीडिया जगह है, तो उसके बाद हर 24 घंटे तंग आ गया है.
Protocol
Discussion
इस वीडियो में, हम बताते हैं कि हमारी प्रयोगशाला नियमित रूप से जमे हुए स्टॉक से एक रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल संस्कृति स्थापित. यह प्रक्रिया किसी भी स्तनधारी सेल अगर एक DMSO समाधान में जमे हुए के साथ सामान्य उपयोग के …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
References
- Cowan, C. A. Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts. , 1650-1656 (2004).
