Etudier biogenèse des membranes avec un Luciferase Assay-Based gène rapporteur

Summary

Ici, nous décrivons les procédures pour l'étude des changements dans la phagocytose induite par l'expression des gènes avec une approche basée sur la luciférase du gène rapporteur utilisant le système à double GloTM Luciferase Assay de Promega.

Abstract

Pour étudier la coordination des différentes voies de synthèse des lipides au cours biogenèse membranaire, il est utile de travailler avec un système expérimental, où la biogenèse membranaire survient rapidement et de façon inductible. Nous avons trouvé que la phagocytose de billes de latex est pratique à ces fins que les cellules rapidement synthétiser les lipides des membranes pour reconstituer les piscines membrane perdue matériau d'emballage au cours engloutissement de particules. Ici, nous décrivons les procédures pour l'étude des changements dans la phagocytose induite par l'expression des gènes avec une approche basée sur la luciférase du gène rapporteur en utilisant le système Dual-Glo Luciferase Assay de Promega.

Protocol

Culture de cellules Cultures stock de rein embryonnaire humain 293 (HEK293) les cellules sont cultivées dans 10 cm de boîtes de culture en «milieu A ', composé de milieu Dulbecco modifié Eagle (DMEM) supplémenté avec un cocktail d'antibiotiques (100 unités par ml de pénicilline et 100 pg par ml de sulfate de streptomycine) et 10% de sérum fœtal bovin (FBS). Pour mettre en place des cellules d'une expérience, le milieu est aspiré et les cellules sont lavées deux fois avec 5 m…