Dieses Video zeigt, wie eine programmierbare Abzieher verwenden, um Patch-Pipetten und scharfen Elektroden für die Elektrophysiologie zu machen. Das gleiche Verfahren kann verwendet werden, um eine Vielzahl von Glas-Tools, einschließlich Injektionsnadeln zu machen.
Abstract
Glas-Mikroelektroden (auch als Pipetten) haben ein Arbeitspferd der Elektrophysiologie seit Jahrzehnten. Heute sind solche Pipetten von Glaskapillaren erfolgt über eine programmierbare Abzieher. Solche Instrumente Wärme der Kapillare entweder mit einem Metallfaden oder einem Laser und zeichnen sich aus dem Glas mit der Schwerkraft, einen Motor oder beides. Pipetten für Patch-Clamp-Aufzeichnung werden unter Verwendung nur Hitze und Schwerkraft, während scharfe Elektroden für die intrazelluläre Aufnahme verwenden eine Kombination von Wärme, Schwerkraft und einem Motor. Das Verfahren zur intrazellulären Aufnahme Pipetten machen, ist ähnlich, die zur Injektionsnadeln für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich cRNA Injektion in Xenopus Oozyten zu machen. Im Allgemeinen, Kapillar-Glas <1,2 mm im Durchmesser wird verwendet, um Pipetten für Patch-Clamp-Aufnahme zu machen, während engeren Glas für die intrazelluläre Aufnahme (Außendurchmesser = 1,0 mm) verwendet wird. Für jedes Werkzeug ist der Abzieher programmiert etwas anders. Dieses Video zeigt, wie man beide Arten von Aufnahmen Pipetten mit vorher festgelegten puller Programme machen.
Protocol
Pulling Pipetten Mit einer Mikroelektrode puller wie Sutter P-97 Flaming / Brown, ziehen eine Reihe von etwa 10-20 Pipetten. Wählen Sie Ihre Kapillare aus Glas. Wir verwenden Borosilikat Kapillaren (Sutter BF150-110 bis 10 mm, 1,5 mm Außendurchmesser, 1,1 mm Innendurchmesser, 10 cm lang). Bewahren Sie das Glas vorsichtig damit es sauber und staubfrei bleibt. Entwerfen Sie ein Ziehen Programm. Wir verwenden einen 5-Schritte-Programm, mit absteigender Hitze und Geschwindi…
Discussion
Das Protokoll dargestellt ist hier im täglichen Einsatz in der Elektrophysiologie Labor und wird auch zur Injektionsnadeln für Zellen und Tieren zu machen. Mit einer programmierbaren Abzieher, ist es leicht, Pipetten für eine Vielzahl von Anwendungen zu machen. Mit Aufmerksamkeit und Pflege, wird das Filament auf Ihren Abzieher für ein Jahr oder länger dauern. Viel Glück mit Ihrer Experimente.
Acknowledgements
Wir danken folgenden Förderorganisationen und Stiftungen für die Unterstützung: National Institutes of Health, National Science Foundation, der American Heart Association, Gesellschaft für Muskeldystrophie, die Donald B. und Delia E. Baxter-Stiftung, die Klingenstein Fonds und der McKnight Endowment for Neuroscience.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Micropipette Puller
Instrument
Sutter Instruments
P-97
Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries
Reagent
Sutter Instruments
BF150-86-10
Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.
L. Brown, A., E. Johnson, B., B. Goodman, M. Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller. J. Vis. Exp. (20), e939, doi:10.3791/939 (2008).