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Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) di modificazioni istoniche da Saccharomyces cerevisiae
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Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) of Histone Modifications from Saccharomyces cerevisiae
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Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) di modificazioni istoniche da Saccharomyces cerevisiae

DOI:
10.3791/57080-v

•

11:06 min

•

December 29, 2017

•

, , ,
1Department of Biological Sciences,University of Maryland

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:52In Vivo Crosslinking of Proteins to DNA
  • 02:19Making Yeast Lysates
  • 04:08Immunoprecipitation (IP) of Modified Histones
  • 05:11Washing IPs, Eluting Histone-DNA Complexes and Reversing Protein-DNA Crosslinks
  • 07:24Quantitative PCR (qPCR) to Detect Enriched Genomic Regions
  • 08:46Results: ChIP Reveals Histone Modification Status at ant Genomic Region
  • 10:17Conclusion

Summary

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Qui, descriviamo un protocollo per immunoprecipitazione della cromatina degli istoni modificati dal lievito Saccharomyces cerevisiae. DNA immunoprecipitato viene successivamente utilizzato per PCR quantitativa per interrogare l'abbondanza e la localizzazione di modifiche post-traduzionali degli istoni in tutto il genoma.

Tags

Chromatin ImmunoprecipitationChIPHistone ModificationsSaccharomyces CerevisiaeGene Expression ControlEnvironmental ConditionsChromatin Binding ProteinsEpitope TagsAntibodiesYeast CellsYPD MediumOptical DensityFormaldehydeGlycineChIP Lysis BufferPMSFProtease InhibitorGlass BeadsBead-beating

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