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Estudando ribonucleótido incorporação: Deteção de vertente específica de ribonucleotídeos no genoma da levedura e mutagênese induzida pela ribonucleotídeo de medição
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Studying Ribonucleotide Incorporation: Strand-specific Detection of Ribonucleotides in the Yeast Genome and Measuring Ribonucleotide-induced Mutagenesis

Estudando ribonucleótido incorporação: Deteção de vertente específica de ribonucleotídeos no genoma da levedura e mutagênese induzida pela ribonucleotídeo de medição

DOI:
10.3791/58020-v

•

09:04 min

•

July 26, 2018

•

, ,
1Genome Integrity and Structural Biology Laboratory,National Institute of Environmental Health Sciences, NIH, DHHS

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:49Alkaline Hydrolysis of Genomic DNA
  • 02:36Strand specific Southern Blot: Transfer
  • 04:37Strand-specific Southern Blot: Hybridization
  • 06:48Results: Assessment of Ribonucleotide Incorporation into DNA
  • 08:08Conclusion

Summary

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Ribonucleotídeos estão entre os mais abundantes nucleotídeos não-canônicos incorporados do genoma durante a replicação do DNA nuclear eucariótica. Se não forem devidamente removidos, ribonucleotídeos podem causar mutagênese e dano do ADN. Aqui, apresentamos duas abordagens experimentais que são usadas para avaliar a abundância de incorporação de ribonucleotídeo DNA e seus efeitos mutagénicos.

Tags

Ribonucleotide IncorporationStrand-specific DetectionYeast GenomeRibonucleotide-induced MutagenesisAlkaline Gel ElectrophoresisSouthern BlottingGenomic DNAPotassium HydroxideAlkaline DNA Loading BufferAgarose GelSodium HydroxideEDTADNA Size MarkerNeutralization BufferSYBR Gold StainUV TransilluminatorAlkaline Transfer BufferNylon MembraneCapillary Action

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