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Einzelschritt-Reinigung der makromolekularen komplexe mit RNA an Biotin und ein Foto-spaltbaren Linker befestigt

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Biochimie

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Single-step Purification of Macromolecular Complexes Using RNA Attached to Biotin and a Photo-cleavable Linker

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Einzelschritt-Reinigung der makromolekularen komplexe mit RNA an Biotin und ein Foto-spaltbaren Linker befestigt

DOI:

10.3791/58697-v

•

08:12 min

•

January 03, 2019

•

Aleksandra Skrajna, Xiao-Cui Yang, Zbigniew Dominski²

¹Integrative Program for Biological and Genome Sciences,University of North Carolina at Chapel Hill, ²Department of Biochemistry and Biophysics,University of North Carolina at Chapel Hill

Chapitres

00:04Titre
00:51Substrate Preparation
01:28Complex Assembly
02:14Immobilization of the RNA/protein Complexes on Streptavidin Beads
04:00UV-Elution
05:08Sample Analysis by Silver Staining Followed by Mass Spectrometry
05:59Results: Analysis of UV-eluted Complexes
07:36Conclusion

Summary

Traduction automatique

RNA/Proteinkomplexe gereinigt mit Botin Streptavidin-Strategie sind Lösung unter denaturierenden Bedingungen in einer Form ungeeignet für die weitere Reinigung und Funktionsanalyse eluiert. Hier beschreiben wir eine Änderung dieser Strategie, die einen Foto-spaltbaren Linker in RNA und einem sanften UV-Elution Schritt nachgeben native und voll funktionsfähige RNA/Proteinkomplexe nutzt.

Tags

RNA Protein Complexes Single-step Purification Biotin Photo-cleavable Linker Mass Spectrometry T7 Generated RNA Adaptor Oligonucleotide Mouse Nuclear Extract EDTA Streptavidin Agarose Beads Binding Buffer Centrifugation Tube Rotation

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