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Single-step purificazione di complessi macromolecolari usando RNA attaccato alla biotina e un Linker foto-spaccabili
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Biochimie
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Journal JoVE Biochimie
Single-step Purification of Macromolecular Complexes Using RNA Attached to Biotin and a Photo-cleavable Linker
DOI:

08:12 min

January 03, 2019

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Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:51Substrate Preparation
  • 01:28Complex Assembly
  • 02:14Immobilization of the RNA/protein Complexes on Streptavidin Beads
  • 04:00UV-Elution
  • 05:08Sample Analysis by Silver Staining Followed by Mass Spectrometry
  • 05:59Results: Analysis of UV-eluted Complexes
  • 07:36Conclusion

Summary

Traduction automatique

Complessi RNA/proteici purificati mediante botin-streptavidina strategia sono eluiti per soluzione in condizioni denaturanti in forma inadatta per ulteriore purificazione e analisi funzionale. Qui, descriviamo una modifica di questa strategia che utilizza un linker foto-spaccabili in RNA e un delicato passaggio di UV-eluizione, producendo complessi RNA/proteine native e completamente funzionale.

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