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Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
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Absolute Quantifizierung des zellfreien Proteinsynthesestoffwechsels durch Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

DOI:
10.3791/60329-v

•

08:06 min

•

October 25, 2019

•

, , , ,
1Robert Frederick Smith School of Chemical and Biomolecular Engineering,Cornell University

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:01Preparation for Aniline Tagging
  • 02:41Labeling Reaction and LC/MS Procedure
  • 06:06Results: Identification and Labeling Results of Metabolites
  • 07:02Conclusion

Summary

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Hier präsentieren wir ein robustes Protokoll zur Quantifizierung von 40 Verbindungen, die am zentralen Kohlenstoff- und Energiestoffwechsel in zellfreien Proteinsynthesereaktionen beteiligt sind. Das zellfreie Synthesegemisch wird mit Anilin zur effektiven Trennung mittels umgekehrter Flüssigchromatographie abgeführt und dann durch Massenspektrometrie unter isotopisch gekennzeichneten internen Standards quantifiziert.

Tags

Cell-free Protein SynthesisMetabolite QuantificationReversed-phase Liquid Chromatography-mass SpectrometryAniline TaggingIsotopic LabelingCentral Carbon MetabolismEnergy Metabolism

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