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Quantification absolue du métabolisme de synthèse des protéines sans cellules par spectrométrie de chromatographie liquide à phase inversée
Journal JoVE
Biochimie
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Journal JoVE Biochimie
Absolute Quantification of Cell-Free Protein Synthesis Metabolism by Reversed-Phase Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
DOI:

08:06 min

October 25, 2019

, , , ,

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:01Preparation for Aniline Tagging
  • 02:41Labeling Reaction and LC/MS Procedure
  • 06:06Results: Identification and Labeling Results of Metabolites
  • 07:02Conclusion

Summary

Traduction automatique

Ici, nous présentons un protocole robuste pour quantifier 40 composés impliqués dans le métabolisme central de carbone et d'énergie dans les réactions de synthèse de protéine sans cellules. Le mélange de synthèse sans cellules est dérivé avec de l'aniline pour une séparation efficace à l'aide d'une chromatographie liquide en phase inversée, puis quantifié par spectrométrie de masse à l'aide de normes internes étiquetées isotopiques.

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