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Dynamique d'oligomerisation des récepteurs de surface cellulaire dans les cellules vivantes par microscopie de fluorescence interne totale combinée à l'analyse du nombre et de la luminosité
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Journal JoVE Biologie
Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis
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Dynamique d'oligomerisation des récepteurs de surface cellulaire dans les cellules vivantes par microscopie de fluorescence interne totale combinée à l'analyse du nombre et de la luminosité

DOI:
10.3791/60398-v

•

10:43 min

•

November 06, 2019

•

, , , ,
1Unit of Microscopy and Dynamic Imaging,Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid, Spain, 2Centro di Imaging Sperimentale,Ospedale San Raffaele, Milan, Italy, 3Unit of Gynecological Oncology Research,European Institute of Oncology IRCCS, Milan, Italy

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:48Sample Preparation
  • 02:38TIRF Imaging: Alignment of the Laser Line and Optimization of TIRF Illumination
  • 04:05TIRF Imaging: Capture of the Time Series
  • 05:46Number & Brightness (N&B): Quality Check of the Time Series
  • 06:34Number & Brightness (N&B): Computation of the B-values in Selected Region-of-interest (ROI)
  • 08:19Results: N&B Analysis and Kinetics of FGFR1 Oligomerization
  • 09:42Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Nous décrivons une approche de formation image pour la détermination de l'état oligomeric moyen des oligomères mEGFP-marqué-récepteurs induits par la liaison de ligand dans la membrane de plasma des cellules vivantes. Le protocole est basé sur la microscopie de la fluorescence de la réflexion interne totale (TIRF) combinée à l'analyse du nombre et de la luminosité (N-B).

Tags

Keywords: OligomerizationCell Surface ReceptorsTIRF MicroscopyNumber And Brightness AnalysisReceptor ClusteringFGFR1Fluorescence FluctuationLive Cell ImagingProtein OligomerizationCell Signaling

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