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PCR-Mutagenese, Klonierung, Expression, schnelle Proteinreinigungsprotokolle und Kristallisation des Wildtyps und der mutierten Formen der Tryptophan-Synthase
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PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase
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PCR-Mutagenese, Klonierung, Expression, schnelle Proteinreinigungsprotokolle und Kristallisation des Wildtyps und der mutierten Formen der Tryptophan-Synthase

DOI:
10.3791/61839-v

•

09:31 min

•

September 26, 2020

•

, , ,
1Department of Chemistry,University of California-Riverside, 2Department of Biochemistry,University of California-Riverside

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 00:44Purification of Wild Type or Mutant Form of α2β2 StTS Complex
  • 03:53Optimized Crystallization for Wild Type and Mutant Form of the α2β2 StTS Comple
  • 06:49Results: Purification of the α- and β -Subunits of the Tryptophan Synthase and the Wild Type and Mutant α2β2 StTS Complexes
  • 08:50Conclusion

Summary

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Dieser Artikel stellt eine Reihe von aufeinanderfolgenden Methoden zur Expression und Reinigung von Salmonella typhimurium tryptophan synthase vor, die dieses Protokoll zu einem schnellen System zur Reinigung des Proteinkomplexes an einem Tag machen. Abgedeckte Methoden sind ortsgerichtete Mutagenese, Proteinexpression in Escherichia coli,Affinitätschromatographie, Gelfiltrationschromatographie und Kristallisation.

Tags

Keywords: PCR MutagenesisCloningExpressionProtein PurificationTryptophan SynthaseSalmonella TyphimuriumAmmonium Sulfate FractionationSize Exclusion ChromatographySDS-PAGEProtein ConcentrationCrystallization

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