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Mutagénesis por PCR, clonación, expresión, protocolos rápidos de purificación de proteínas y cristalización del tipo salvaje y formas mutantes de triptófano sintasa
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PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase
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Mutagénesis por PCR, clonación, expresión, protocolos rápidos de purificación de proteínas y cristalización del tipo salvaje y formas mutantes de triptófano sintasa

DOI:
10.3791/61839-v

•

09:31 min

•

September 26, 2020

•

, , ,
1Department of Chemistry,University of California-Riverside, 2Department of Biochemistry,University of California-Riverside

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 00:44Purification of Wild Type or Mutant Form of α2β2 StTS Complex
  • 03:53Optimized Crystallization for Wild Type and Mutant Form of the α2β2 StTS Comple
  • 06:49Results: Purification of the α- and β -Subunits of the Tryptophan Synthase and the Wild Type and Mutant α2β2 StTS Complexes
  • 08:50Conclusion

Summary

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Este artículo presenta una serie de métodos consecutivos para la expresión y purificación de Salmonella typhimurium triptófano sintasa comp este protocolo un sistema rápido para purificar el complejo proteico en un día. Los métodos cubiertos son la mutagénesis dirigida al sitio, la expresión de proteínas en Escherichia coli,la cromatografía de afinidad, la cromatografía de filtración en gel y la cristalización.

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Keywords: PCR MutagenesisCloningExpressionProtein PurificationTryptophan SynthaseSalmonella TyphimuriumAmmonium Sulfate FractionationSize Exclusion ChromatographySDS-PAGEProtein ConcentrationCrystallization

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