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近接ライゲーションアッセイを用いた異流体せん断応力条件下でのTGFβ/BMP/SMADシグナル伝達の可視化と定量化
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Biochimie
Visualization and Quantification of TGFβ/BMP/SMAD Signaling under Different Fluid Shear Stress Conditions using Proximity-Ligation-Assay
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近接ライゲーションアッセイを用いた異流体せん断応力条件下でのTGFβ/BMP/SMADシグナル伝達の可視化と定量化
DOI:
10.3791/62608-v
•
11:38 min
•
September 14, 2021
•
Paul-Lennard Mendez
2
,
Leon Obendorf
,
Petra Knaus
1
Institute for Chemistry and Biochemistry
,
Freie Universität Berlin
,
2
International Max-Planck Research School for Biology and Computation
Chapitres
00:05
Introduction
00:40
Cell Culture and Fluid Shear Stress Exposure
02:55
Fixation
04:58
Blocking and Incubation with Primary Antibody
06:28
Incubation with PLA Probe and Ligation
07:34
Amplification and Mounting
09:14
Results: Effect of Shear Stress on the SMAD Protein Interactions
11:02
Conclusion
Summary
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ここでは、病理的および生理的な流体せん断ストレス条件に曝露した内皮細胞における近接ライゲーションアッセイ(PLA)を用いて、複数のSMAD複合体を同時に可視化・解析するプロトコルを確立する。
Tags
TGF-β/BMP/SMAD Signaling
Proximity Ligation Assay
Fluid Shear Stress
Microfluidic Flow Channels
HUVEC Cells
Transcription Factor Complexes
Vascular Biology
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