Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:03Introduction
- 01:15Determination (in silico) of the ANS and SERCA N‐Domain Interaction
- 03:09Expression and Purification of the Recombinant N‐Domain
- 03:39Monitor the Formation of the ANS‐N‐Domain Complex Based on ANS and N‐Domain Fluorescence Intensity Changes
- 07:38N‐Domain Intrinsic Fluorescence Titration by Trp Chemical Modification with NBS
- 08:43Titrate the NBS Modified N‐Domain with ANS by Recording Fluorescence Spectra at 25°C
- 09:37Evidence of ANS Binding to the Chemically Modified N‐Domain by Excitation at λ = 370 nm
- 10:32Results Overview
- 11:30Conclusions
ANS binder sig til Ca2+-ATPase rekombinant N-domæne. Fluorescensspektre viser et FRET-lignende mønster ved excitation ved en bølgelængde på 295 nm. NBS-medieret kemisk modifikation af Trp slukker fluorescensen af N-domæne, hvilket fører til fraværet af energioverførsel (FRET) mellem Trp-restkoncentrationerne og ANS.
