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マイクロRNAクラスターネットワーク解析のためのCRISPR遺伝子編集ツール
Journal JoVE
Biologie
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Journal JoVE Biologie
CRISPR Gene Editing Tool for MicroRNA Cluster Network Analysis
DOI:

10:40 min

April 25, 2022

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Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 00:58Preparation of CRISPR Gene Editing and Guide RNA Design to Generate miRNA Cluster Knockout Cell Lines
  • 02:06Generation of Stable Lentiviral Cell Lines Carrying the DOX-Inducible Cas9 Expression Cassette
  • 03:20Performing CRISPR Reactions by Cas9 Induction and Synthetic Guide RNA Transfection of Cells Using a High-Throughput Format
  • 07:22PCR Genotyping of CRISPR Cell Lines Using Crude Cell Lysates
  • 08:37Results: High-Throughput CRISPR Experimental Design to Generate Multiple miR-888 Cluster Deletion Combinations
  • 09:51Conclusion

Summary

Traduction automatique

このプロトコルは、マイクロRNAクラスターネットワーク解析のための、規則的に間隔をあけた短い回文反復(CRISPR)遺伝子編集ワークフローをクラスター化したハイスループットのクラスター化を記述しており、1回の実験で35 kbのユニークなmiRNAクラスターメンバー欠失の組み合わせを持つ遺伝子組み換え細胞株のパネルを迅速に生成できます。

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