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CRISPR/Cas9-मध्यस्थता जीन-मैनिपुलेटेड माउस मॉडल विकसित करने के लिए भ्रूण स्टेम सेल में अत्यधिक कुशल जीन लक्ष्यीकरण
Journal JoVE
Biologie du développement
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Journal JoVE Biologie du développement
CRISPR/Cas9-Mediated Highly Efficient Gene Targeting in Embryonic Stem Cells for Developing Gene-Manipulated Mouse Models
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CRISPR/Cas9-मध्यस्थता जीन-मैनिपुलेटेड माउस मॉडल विकसित करने के लिए भ्रूण स्टेम सेल में अत्यधिक कुशल जीन लक्ष्यीकरण

DOI:
10.3791/64385-v

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10:57 min

•

August 24, 2022

•

, ,
1Laboratory of Reproductive Systems Biology, Center for Experimental Medicine and Systems Biology, The Institute of Medical Science,The University of Tokyo, 2Research Institute for Microbial Diseases,Osaka University

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:06Gene Targeting of Embryonic Stem Cells (ESCs)
  • 04:16PCR Genotyping of Targeted ESCs
  • 07:02Preparation of Eight-Cell Stage Embryo and Microinjection of ESCs
  • 09:49Results: Screening of Targeted ESC Clones
  • 10:10Conclusion

Summary

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यहां हम भ्रूण स्टेम कोशिकाओं का उपयोग करके आनुवंशिक रूप से संशोधित माउस मॉडल विकसित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, खासकर बड़े डीएनए नॉक-इन (केआई) के लिए। इस प्रोटोकॉल को CRISPR / Cas9 जीनोम संपादन का उपयोग करके ट्यून किया गया है, जिसके परिणामस्वरूप पारंपरिक समरूप पुनर्संयोजन-मध्यस्थता रैखिक डीएनए लक्ष्यीकरण विधि की तुलना में केआई दक्षता में काफी सुधार हुआ है।

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CRISPR/Cas9Gene TargetingEmbryonic Stem CellsGene-manipulated Mouse ModelsGene FunctionsIn VivoDrug SelectionMouse Embryonic FibroblastESCMEFElectroporationCas9 RNP DNA

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