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Ensaio de Sedimentação à Base de Concanavalina A para Medir a Ligação ao Substrato de Fosfatases Glucanas
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Concanavalin A-Based Sedimentation Assay to Measure Substrate Binding of Glucan Phosphatases

Ensaio de Sedimentação à Base de Concanavalina A para Medir a Ligação ao Substrato de Fosfatases Glucanas

DOI:
10.3791/64700-v

•

09:07 min

•

December 23, 2022

•

, , , ,
1Department of Chemistry,Skidmore College

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:03Preparation of ConA‐Sepharose Beads and ConA‐Sepharose: Amylopectin Beads
  • 02:19Starch Excess4 (SEX4) Protein Binding with ConA‐Sepharose: Amylopectin Beads
  • 03:41Running SDS‐PAGE Gels
  • 04:27Western Blotting for Chemiluminescence Detection and Data Analysis
  • 06:28Results: Binding Affinity of SEX4 to ConA‐Sepharose‐Amylopectin Beads
  • 08:18Conclusion

Summary

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Este método descreve um ensaio de sedimentação in vitro baseado em lectina para quantificar a afinidade de ligação da fosfatase glucana e amilopectina. Este ensaio de co-sedimentação é confiável para medir a ligação do substrato glucana fosfatase e pode ser aplicado a vários substratos glucanos solubilizados.

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Keywords: Concanavalin ASedimentation AssayGlucan PhosphatasesSubstrate BindingCarbohydrate-protein InteractionsSEX4 MutantsAmylopectinBinding BufferCentrifugationProtease Inhibitor

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