Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
1Centro de Biología Celular y Molecular de Enfermedades,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 2Departamento de Medios y Creativo,Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología (INDICASAT-AIP), 3Sistema Nacional de Investigación-Secretaría Nacional de Ciencia,Tecnología e Innovación (SNI-SENACYT)
Chapitres
- 00:04Introduction
- 00:27Amplification and Insertion of the eGFP Gene into the pLEXSY‐2.1 Vector
- 02:39Linearization of the pLEXSY Expression Plasmid
- 03:26Transfection of L. panamensis and L. donovani by Electroporation
- 05:00Polyclonal Selection in Culture
- 06:41Confirmation of Genomic Integration
- 07:09Cloning by Limiting Dilution
- 08:12Results: Confirmation of eGFP Cassette Expression and Chromosomal Insertion
- 09:40Conclusion
Hier beschrijven we de methodologie die wordt gebruikt voor het genereren van L. panamensis - en L. donovani-stammen die het gen voor eGFP tot expressie brengen als een stabiel geïntegreerd transgen met behulp van het pLEXSY-systeem. Getransfecteerde parasieten werden gekloond door verdunning te beperken en klonen met de hoogste fluorescentie-intensiteit in beide soorten werden geselecteerd voor verder gebruik in medicijnscreeningtests.
