Detta protokoll beskriver anrikningen av inhemska mykobakteriella extracellulära vesiklar (mEV) från axeniska kulturer av Mycobacterium smegmatis (Msm) och hur mCherry (en röd fluorescerande reporter)-innehållande rekombinanta MsmEVs kan designas och anrikas. Slutligen verifieras det nya tillvägagångssättet genom anrikning av MsmEVs som innehåller EsxA-proteinet Mycobacterium tuberculosis.