Summary

Kemik İliği Hematopoetik Hücreler, Homing

Published: March 18, 2009
doi:

Summary

Bu makale, kemik iliği hematopoetik hücrelerin kendi nişler homing çalışma için kullanılan bir protokol tanımlamaktadır.

Abstract

Homing nakledilen hematopoetik hücreler ve aşılamak ya da kemik iliği ikamet kurmak mümkün sağlayan bir olgudur. Çeşitli chemomkines ve reseptörler hematopoietik kök hücre homing katılıyor. [1, 2]

Bu yazıda, hematopoietik kök hücre çalışmalarında kullanılan klasik homing protokol özetliyor. Genel olarak bu homing ihtiyaçları araştırılmalıdır hücre popülasyonu izole Bu nüfusun ilgi bir boya ile boyanması ve bu hücrelerin bir alıcı hayvan kan akışı içine enjekte içerir. Alıcı hayvan sonra enjeksiyon ve ilgi boya için pozitif hücrelerin yüzdesi ya da mutlak sayısı için değerlendirilen kemik iliği sonra önceden belirlenmiş bir zamanda kurban. En yaygın deneysel şemaları, genetik olarak farklı iki hayvanlardan elde edilen hematopoietik hücreleri (vahşi bir hayvan ve ilgili knock-out) homing verimlilik biri karşılaştırılır. Bu makale, deney gibi çerçevesinde hematopoetik hücre homing protokol tanımlamaktadır.

Protocol

Biz, deneyde kullanılmak üzere hücrelere açılan homing deney başlar. Alıcı hayvanların uzun kemiklerde nişler tüm kemik iliği homing WT C57BL/6J (WT) gibi hayvanlardan elde edilen kemik iliği hücreleri için farklı ve transgenik olanlar eğer bu deneme için biz bulmaya ilgilenen Lysophosphatidic Reseptör 1 (LPAR1) (KO) nakavt. Deney başlamadan önce, bu deney için gerekli malzemeleri toplamak. Hücrelerin yerine ex-vivo analizi için kullanılan bir alıcı hayvan nakledilen olacak laboratuvar, öz…

Discussion

Homing süreci bu sayede kemik iliği hücreleri kök hücreleri, progenitör hücreler ve farklı hücreler, kan akışı veya farelerde kemik iliği boşluğuna enjekte edildikten sonra kemik iliği onların yol içine dahil. Tanımı açık olarak, bir bilim adamı, hematopoietik kök hücre, progenitör hücreler ya da hücre sıralayarak izole işaretleyicidir tarafından belirlenen ve farklılaşmış hücrelerin homing çalışma seçebilirler. Tipik olarak, bilim adamları, soy belirteçler için tükenmiş kemi…

Acknowledgements

Bu protokol Dr David Scadden laboratuvar test ve optimize edilmiştir. Finansman, Dana-Farber Kanser Enstitüsü / Massachusetts Genel Hastanesi Klinik Hematoloji ve Onkoloji Burs Programı tarafından sağlanmaktadır.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline   Mediatech, Inc 21-031-CV  
Sterile Fetal Bovine Serum   Valley Biomedical, Inc BS3033  
0.5M EDTA (pH 8.0)   Boston BioProducts BM-150  
Tryphan Blue solution   Mediatech, Inc 25-900-CI  
ACK Lysing Buffer   Lonza 10-548E  
Isopropranolol U.S.P.   Denison Pharmaceuticals, Inc    
Vybrant DiD cell-labelling solution   Invitrogen V22887  
Vybrant DiI cell-labelling solution   Invitrogen V22885  

Riferimenti

  1. Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
  2. Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
check_url/it/1104?article_type=t

Play Video

Citazione di questo articolo
Yusuf, R. Z., Scadden, D. T. Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow. J. Vis. Exp. (25), e1104, doi:10.3791/1104 (2009).

View Video