Mensajeras de las células hematopoyéticas de la médula ósea

Summary

En este artículo se describe un protocolo que se utiliza para estudiar el homing de las células hematopoyéticas de sus nichos en la médula ósea.

Abstract

Homing es el fenómeno por el cual las células hematopoyéticas trasplantadas son capaces de viajar y se injertan o establecer su residencia en la médula ósea. Chemomkines diversos y receptores están implicados en el homing de las células madre hematopoyéticas. [1, 2]

Este documento describe el protocolo clásico homing utilizadas en estudios de células madre hematopoyéticas. En general, esto consiste en aislar la población de células cuyas necesidades homing para ser investigados, la tinción de esta población con un tinte de interés e inyectar estas células en el torrente sanguíneo de un animal receptor. El animal receptor entonces se sacrificó en un tiempo predeterminado después de la inyección y la médula ósea para evaluar el porcentaje o el número absoluto de células que son positivas para el tinte de interés. En uno de los proyectos experimentales más comunes, la eficiencia de homing de las células hematopoyéticas de dos animales genéticamente distintas (un animal de tipo salvaje y el knock-out correspondiente) es comparada. En este artículo se describe el protocolo de células hematopoyéticas de recalada en el marco de como experimento.

Protocol

Al comenzar el experimento mediante la extracción de células mensajeras para ser utilizado en el experimento. Para este experimento actual que estamos interesados ​​en saber si la recalada de toda la médula ósea de los nichos en los huesos largos de los animales receptores es diferente para las células de la médula ósea extraídas de animales WT como C57BL/6J (WT) y los que son transgénicos KO para el receptor de lisofosfatídico 1 (LPAR1) (KO). Antes de empezar el experimento, vamos a recoger los materiales que n…

Discussion

Homing es el proceso mediante el cual las células de la médula ósea como células madre, células progenitoras y las células diferenciadas, su camino en la médula ósea después de ser inyectadas en el torrente sanguíneo o en la cavidad de la médula ósea de ratones. Como se desprende de la definición, un científico puede optar por estudiar el homing de las células madre hematopoyéticas, las células progenitoras o células diferenciadas identificadas por inmunofenotipo y aislado por la clasificación de cél…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Mediatech, Inc	21-031-CV
Sterile Fetal Bovine Serum		Valley Biomedical, Inc	BS3033
0.5M EDTA (pH 8.0)		Boston BioProducts	BM-150
Tryphan Blue solution		Mediatech, Inc	25-900-CI
ACK Lysing Buffer		Lonza	10-548E
Isopropranolol U.S.P.		Denison Pharmaceuticals, Inc
Vybrant DiD cell-labelling solution		Invitrogen	V22887
Vybrant DiI cell-labelling solution		Invitrogen	V22885