Dieses Protokoll zeigt, wie Sie sezieren<em> Drosophila</em> Larven in Vorbereitung für die Immunhistochemie und / oder die Abbildung der neuromuskulären Synapse.
Abstract
Die<em> Drosophila</em> Neuromuskulären Synapse (NMJ) ist ein etabliertes Modellsystem für die Untersuchung der synaptischen Entwicklung und Plastizität eingesetzt. Die weit verbreitete Verwendung des<em> Drosophila</em> Motor-System ist aufgrund seiner hohen Verfügbarkeit. Es kann mit Single-Cell-Auflösung analysiert werden. Es gibt 30 Muskeln pro hemisegment deren Anordnung innerhalb des peripheren Körper Wand bekannt sind. Insgesamt 35 Motoneuronen, diese Muskeln legen in ein Muster, das high fidelity hat. Mit Molekularbiologie und Genetik, kann man transgene Tiere oder Mutanten. Dann kann einer Studie der Entwicklung Auswirkungen auf die Morphologie und Funktion der NMJ. Um die NMJ für das Studium zuzugreifen, ist es notwendig, sorgfältig zu sezieren jeder Larve. In diesem Artikel zeigen wir, wie man richtig zerlegen<em> Drosophila</em> Larven für das Studium der NMJ indem alle inneren Organe, während die Körper Wand intakt. Diese Technik eignet sich Larven für die Bildgebung, Immunhistochemie oder Elektrophysiologie vorzubereiten.
Protocol
Bevor Sie beginnen Alle Kulturen sollten bei 25 ° C gezüchtet werden HL3.1 Dissektion Puffer kann im Voraus zubereitet werden. Nehmen Sie einen 50 ml Aliquot HL3.1 und bewahren Sie es auf Eis. Bereiten Sie 15 ml frischer 3,5% Formaldehyd in HL3.1. Halten Sie es auf Eis. Larven Dissection Gib einen Tropfen des kalten HL3.1 auf der Dissektion Platte. Dies wird das Tier vor dem Austrocknen und betäuben das Tier macht es einfacher, mit der Arbei…
Discussion
Die Dissektionstechnik in diesem Video gezeigt, kann zur Drosophila-Larven für eine Vielzahl von experimentellen Techniken vorzubereiten. Wenn fluoreszierende Protein-Tags vorhanden sind, können die Larven montiert und abgebildet sofort. Ansonsten kann Immunfärbung durchgeführt, um spezifische synaptische Fächer zu markieren. Darüber hinaus können Elektrophysiologie leicht auf der präparierten Larven durchgeführt werden, um das Funktionieren der Neurotransmission zu bewerten.
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.