Drosophila larven NMJ Dissection
Summary
Dit protocol laat zien hoe om te ontleden<em> Drosophila</em> Larven ter voorbereiding van immunohistochemie en / of beeldvorming van de neuromusculaire overgang.
Abstract
De<em> Drosophila</em> Neuromusculaire junctie (NMJ) is een gevestigd model dat wordt gebruikt voor de studie van synaptische plasticiteit en ontwikkeling. Het wijdverbreide gebruik van de<em> Drosophila</em> Motor systeem is te wijten aan de hoge toegankelijkheid. Het kan worden geanalyseerd met single-cell resolutie. Er zijn 30 spieren per hemisegment wiens afspraak binnen de perifere lichaam muur zijn bekend. Een totaal van 35 motorneuronen hechten aan deze spieren in een patroon dat high fidelity heeft. Met behulp van moleculaire biologie en genetica, kan men maken van transgene dieren of mutanten. Dan kan men de studie van de ontwikkeling gevolgen voor de morfologie en functie van de NMJ. Om toegang te krijgen van de NMJ om te studeren, is het noodzakelijk om zorgvuldig te ontleden elke larve. In dit artikel laten we zien hoe goed ontleden<em> Drosophila</em> Larven voor studie van de NMJ door het verwijderen van alle interne organen, terwijl het verlaten van het lichaam muur intact. Deze techniek is geschikt om larven te bereiden voor de beeldvorming, immunohistochemie, of elektrofysiologie.
Protocol
Discussion
De dissectie techniek gedemonstreerd in deze video kan worden gebruikt om Drosophila larven voor te bereiden op een verscheidenheid aan experimentele technieken. Als fluorescerend eiwit labels aanwezig zijn, kunnen de larven worden gemonteerd en direct afgebeeld. Anders kan immunokleuring worden uitgevoerd om bepaalde synaptische compartimenten te markeren. Daarnaast kan elektrofysiologie gemakkelijk worden uitgevoerd op de ontleed larven van de werking van neurotransmissie te evalueren.
<p class="jove_cont…Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
