Drosophile larvaire JNM Dissection
Summary
Ce protocole démontre comment disséquer<em> Drosophile</emLarves> en préparation pour l'immunohistochimie et / ou l'imagerie de la jonction neuromusculaire.
Abstract
L'<em> Drosophile</em> Jonction neuromusculaire (JNM) est un système modèle établi utilisée pour l'étude du développement synaptique et la plasticité. L'utilisation généralisée de la<em> Drosophile</em> Système de moteur est due à sa grande accessibilité. Elle peut être analysée avec une seule cellule de résolution. Il ya 30 muscles par hemisegment dont l'agencement intérieur la paroi du corps périphériques sont connus. Un total de 35 neurones moteurs attachent à ces muscles dans un modèle qui a la haute fidélité. En utilisant la biologie moléculaire et la génétique, on peut créer des animaux transgéniques ou mutants. Ensuite, on peut étudier les conséquences du développement sur la morphologie et la fonction du MNJ. Afin d'accéder à la JNM pour l'étude, il est nécessaire de bien décortiquer chaque larve. Dans cet article, nous démontrons comment bien décortiquer<em> Drosophile</emLarves> pour l'étude du MNJ en supprimant tous les organes internes, tout en laissant intacte la paroi du corps. Cette technique est adaptée pour préparer les larves de l'imagerie, l'immunohistochimie ou l'électrophysiologie.
Protocol
Discussion
La technique de dissection démontré dans cette vidéo peut être utilisée pour préparer des larves de drosophile pour une variété de techniques expérimentales. Si les balises protéine fluorescente sont présents, les larves peuvent être montés et imagé immédiatement. Sinon, immunomarquage peuvent être effectuées afin de marquer spécifiques compartiments synaptiques. En outre, l'électrophysiologie peut facilement être effectuée sur des larves disséquées afin d'évaluer le fonctionneme…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
