Это видео показывает процедуру выделения нетронутыми протопластов из тканей 14-дневных проростков арабидопсиса. Учитывая, что изолированных протопластов остаются неизменными, по крайней мере 96 ч и изолированы от саженцев, а не один-месячного взрослых растений, эта процедура ускоряет анализов требует нетронутыми протопластов.
Abstract
Протопласты растительных клеток, которые имели их клеточных стенок ферментативно удалены. Выделение протопластов из различных растительных тканях впервые сообщили о более чем 40 лет назад<sup> 1</sup> И с тех пор была адаптирована для изучения различных клеточных процессов, таких как внутриклеточную локализацию белков, изоляция интактных органелл и целевого гена-инактивации двухцепочечной РНК-интерференция (RNAi)<sup> 2-5</sup>. Большинство протоколов протопластов изоляции используем лиственные тканей зрелого Arabidopsis (например, 35-дневных растений)<sup> 2-4</sup>. Мы изменили существующие протоколы, используя 14-дневных проростков Arabidopsis. В этой процедуре, один грамм 14-дневных проростков дали 5 10<sup> 6</sup> -10<sup> 7</sup> Протопластов, которые остаются неизменными по крайней мере 96 часов. Выход протопластов из саженцев сравнима с препаратами из листьев зрелых Arabidopsis, но вместо 35-36 дней, выделение протопластов завершен в течение 15 дней. Это позволяет уменьшить время и пространство роста камеры, которые необходимы для выделения протопластов, когда взрослые растения используются, и ускоряет течение исследований, которые требуют нетронутыми протопластов.
Protocol
Часть 1. Подготовка твердой среде для выращивания растений. Как правило, мы культура растений на сосредоточена Murasige и Скуга (MS) среде с добавлением 1% сахарозы и 0,7% агара. Он содержит все необходимые ингредиенты сохранить растения здоровыми. Для пригото?…
Discussion
Для обеспечения высокого выхода интактных протопластов это очень важно для запуска со здоровыми растениями. Использовать фильтр-стерилизовать решения для выделения протопластов. Помните, что протопласты хрупкой. Поэтому, когда вы обращаетесь протопластов, не смешиваются, пипетки ил?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Корнельского университета Сельскохозяйственной Экспериментальной Станции (CUAES) Нью-Йоркской-125433 Hatch Грант и Корнельский Start-Up Грант присуждается OKV
Zhai, Z., Jung, H., Vatamaniuk, O. K. Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (30), e1149, doi:10.3791/1149 (2009).