ES Hücre türetilen nöroepitelyal Hücre Kültürleri
Summary
Stromal hücre kaynaklı etkinlik inducing (SDIA) kullanarak embriyonik kök (ES) hücreleri nöroepitelyal öncüleri türetilmesi.
Abstract
Embriyonik kök hücrelerin yeni tedavilerin geliştirilmesi için cazip bir araç haline getirir tüm germ hücreleri ayırt etmek için bir potansiyele sahip. Genel olarak, ES hücrelerinin farklılaşma, daha sonra yayılır ve olgun hücre fenotipleri içine ayırt edilebilir olgunlaşmamış progenitör hücreler, ilk oluşturmak için konsept izler. İlk olarak, olgun sinir hücrelerine olgunlaşmamış nöroepitelyal öncüleri ve ikinci, farklılaşma türetme ve genişleme: Bu aynı zamanda sinir hücrelerinin gelişiminde iki önemli adımlar takip ettiği ES hücre kökenli bir nöron için geçerlidir. Neuroectoderm dahil olmak üzere tüm germ hücreleri farklılaşma ortaya koymaktadır embriyoid gövde (EB) oluşumu, ES hücrelerinin sinir atalarıdır üretmek için ortak bir yöntem dayanmaktadır. Kafatası kemik iliği kaynaklı stromal hücreler (1) ile birlikte kültür ES hücreleri tarafından elde edilebilir stromal hücre kaynaklı etkinlik inducing (SDIA), nöroepitelyal hücre gelişimi neden için alternatif ve daha verimli bir yöntem kullanır. , EB oluşumu ve SDIA Her ikisi de, sinir benzemeye düşünülmektedir rozet benzeri yapıların geliştirilmesi, tüp ve / veya nöral krest gibi atalarıdır ortaya koymaktadır. Sinir öncüleri tanımlı kültür koşulları kullanarak belirli nöronlar ve glia hücreleri içine alacak şekilde genişlemiştir ve daha farklılaşmış, izole edilebilir. Burada, üretim ve izolasyon gibi rozet, stromal hücre hattı MS5 (2-5) ile birlikte kültür deneylerinde açıklar.
Protocol
Discussion
Bu protokol, SDIA kullanarak insan ES hücrelerinin nöroepitelyal hücreleri üreten ve izole farklı adımları gösteriyor. Bu yöntemin uygulama manifoldu ve belirtilen nöron (örneğin 1, 2, 5-9) üretmek için birçok protokol olmuştur. Rozet anterior fenotip (2, 5, 10) nöral tüp hücreleri benzerler ve aynı zamanda nöral krest atalarıdır (11, 12) içeren düşünülmektedir. Buna ek olarak, belirli faktörler tarafından belirlenen kültür koşulları desenli olabilir çünkü onlar plastisite belirli bir düzeyde muhafaza. …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| L-glutamine | Gibco | 25030 | ||
| alpha-MEM | Gibco | 12571 | ||
| penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| Knockout-DMEM | Gibco | 10829 | ||
| Knockout serum replacement | Gibco | 10828 | ||
| MEM non-essential amino acid solution | Gibco | 12383 | ||
| DMEM/F12 | Gibco | 11330 | ||
| N2-A supplement | Stem Cell Technologies | 07152 | ||
| mitomycin-C | Sigma | M0503 | ||
| gelatine type-A | Sigma | G1890 | ||
| poly-L-ornithine | Sigma | P4957 | 0.01 % solution | |
| laminin | Sigma | L-2020 | ||
| fibronectin | Sigma | F2006 | ||
| basic fibroblast growth factor (bFGF) | Invitrogen | 13256 | ||
| 1 ml syringe with 27 1/2 G needle | Becton Dickinson | 309623 | ||
| N2-A media | medium | DMEM/F12 + 1% N2-A supplement | ||
| Serum replacement media (SRM) | medium | Knockout-DMEM + 20 % Knockout serum replacement +1% MEM non-essential amino acid solution + 2 mM L-glutamine | ||
| α-MEM media | medium | α-MEM + 10 % FBS + 2 mM L-glutamine + 1%penicillin/streptomycin | ||
| MS5 | cell line | stromal cells | ||
| Microscope | ||||
| 6 well plates | for tissue culture |
Riferimenti
- Kawasaki, H., et al. Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity. Neuron. 28, 31-40 (2000).
- Perrier, A. L., et al. Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).
- Pruszak, J., Isacson, O., Sullivan, S., Cowan, C., Eggan, K. Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons. Human Embryonic Stem Cells: The Practical Handbook. , (2007).
- Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations. Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).
- Sonntag, K. C., et al. Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin. Stem Cells. 25, 411-418 (2007).
- Kawasaki, H., et al. Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).
- Ko, J. Y., et al. Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons. J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).
- Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons. J Neurochem. , (2007).
- Zhang, S. C. Neural subtype specification from embryonic stem cells. Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).
- Pankratz, M. T., et al. Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage. Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).
- Lazzari, G., et al. Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro. Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).
- Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells. Stem Cells. 23, 923-930 (2005).
