Сотовая Токсичность Nanogenomedicine в MCF-7, клеточная линия: МТТ анализа
Summary
Анализ МТТ является простым и воспроизводимым колориметрического анализа для оценки жизнеспособности клеток, основанный на уменьшении желтого МТТ и производство нерастворимые в воде фиолетовый формазана. Здесь, жизнеспособность MCF-7 клеток при лечении nanogenomedicine была оценена.
Abstract
Цитотоксичность футуристический nanogenomedicine (например, коротких интерферирующих РНК и антисмысловых), могут помешать его клинической разработки. Из них ген медицины и / или ее носитель может вызывать сотовой токсичности. Для оценки таких цитотоксичность, общая методология во многом зависит от использования 3 – (4, 5-диметил-2-тиазолил) -2, 5-дифенил-2H-тетразолия бромид (МТТ) анализа, который широко используется в качестве колориметрического подхода, основанного на активности митохондриальных ферментов дегидрогеназы в клетках. В нынешней расследования, MCF-7 клеток были привиты в 96-луночного планшета и при 50% слияния с ними обращались с различными nanopolyplexes и подвергается МТТ анализ после 24 часов. Водорастворимые желтого МТТ метаболизируется метаболически активных клеток в нерастворимые в воде фиолетовый формазана, который далее растворяется в буфере рН диметилсульфоксида и Sornson с 10,5. Полученный продукт может быть определена количественно спектрофотометрически использованием ридер при 570 нм.
Protocol
Discussion
Анализ МТТ считается универсальным методом и, соответственно, жизнеспособность клетки могут быть оценены на различных методов лечения. Производство результирующая формазана, как представляется, пропорционально уровню энергетического обмена в клетках. Таким образом, можно измерить ?…
Acknowledgements
Авторы хотели бы выразить признательность стволовых клеток и технологии Шахид Гази Тебриз компаний, соответственно, для обеспечения DMEM без фенола красного и стерильной воды для инъекций в качестве подарков.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
Riferimenti
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Ricerca sul cancro. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
