染色体分析のためのヒト胚性幹細胞の染色体スプレッドの準備
Summary
核型分析は、広く遺伝子変異を検出するために使用されるシンプルかつ有用な技術である。ここでは、文化の中で維持、これらの細胞の染色体の状態を監視するためのヒト胚性幹細胞の染色体の広がりの準備のためのステップのプロトコルバイステップで説明します。
Abstract
ヒト胚性幹細胞（ヒトES細胞）安定した二倍体の核型1を提示することが示されているが、多くの研究は、培養条件に応じて、彼らはそのような全体または染色体の部品の追加などの染色体異常を取得する傾向になることを報告している。確かに、長期培養の間に、核型の変化はときに酵素的または化学的解離が観察される継代のためのコロニーのマニュアル解剖が安定核型5を保持しながら、2,3,4が使用されています。加えて、フィーダー細胞の除去など環境の変化はまた、ヒトES細胞3,6の遺伝学的完全性が損なわれるようです。一度染色体変異が細胞生理に影響を与える可能性、in vitroでのヒトES細胞の遺伝的整合性の特性は、胚発生の研究と薬物検査に不可欠なツールとして重要な考慮hESCのです。さらに、将来の治療目的のために染色体の変化が頻繁に発癌に関連付けられているように大変な問題です。
ここでは、G -バンディング、FISH、SKYやCGHの技法7,8で設定された染色体のその後の分析のために高品質の染色体のスプレッドを得るために簡単で便利な方法を示しています。我々は、転座とaneuploidiesの外観をモニターするために5継代の間隔で定期的に染色体の状態を確認することをお勧めします
プリシラブリットとラファエラサルトルは、紙にも同様に貢献した。
Protocol
Discussion
染色体スプレッドの準備は、G -バンディング、およびそのようなFISH、SKYやCGHなどのより高度なテクニックとして日常的に技術による胚性幹細胞の遺伝的状態を正常に解析するための重要なステップです。
この手順は、細胞周期の長さに依存するコルセミドインキュベーション、期間を変化させることで、多くの細胞型に適用することができます。胚様体（EB）のために?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | ||
| Colcemid Karyo MAX | Gibco | 15212-012 | ||
| EDTA | Isofar | 721 | ||
| Glacial acetic acid | Isofar | 100 | ||
| Methanol | Isofar | 208 | ||
| Potassium Chloride (KCl) | Merck | 104.931.000 | ||
| Slide | Bioslide | 7105-1 | ||
| Tripsin | SIGMA | T4799 |
Riferimenti
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