이 프로토콜은 염료가 조정 해상도 등 기니 돼지 장용 신경계의 plexuses으로 손상 신경망에서 전기 활동의 광학 녹음을 활성화하는 방법 전압에 민감한 개념 단일 세포에서 다중 ganglionic 회로 등을 꼽을 수 있습니다.
장용 신경계 (팔)는 격리 복잡한 행동을 수행하는 능력이 확인된 기능과 자체 네트워크를 포함하고 있습니다. 그 뉴런은 (직경 10-25 μm의) 창자 벽의 별개의 비행기를 역사는 plexuses에 배열되어<sup> 1</sup>; myenteric 신경 얼기는 세로와 원형 근육층 및 원형 근육 층과 점막 사이의 submucous 신경 얼기 사이 찾을 수 있습니다. 이러한 plexuses에 대한 이펙터 시스템 때문에 (상피 운반, 내분비 세포, 면역 요소, 혈관 및 평활근)이 또한 창자 벽에 포함된 있으며, 세미 손상 준비는 여러 반응 경로의 개별 구성 요소를 보존되는 해부하실 수 있습니다. 효과기 시스템의 동작은 콘서트에서 행동 submucous와 myenteric plexuses에 의해 제어됩니다. 따라서, 신경 사이 사이, 그리고 plexuses 간의 통신의 시냅스 상호 작용에 대한 자세한 지식은 정상적인 위장 기능을 이해하는 데 필수적입니다. 팔은 손상 신경계로 하나의 연결 네트워크 및 생리 출력의 전기적 동작과 분자 및 세포 이벤트를 상호 연관 수있는 독특한 실험 모델입니다. 때문에 plexuses의 준 2 차원 조직의 팔은 특히 전압에 민감한 염료를 고용되는 여러 사이트 광 기록 기술을 사용하여 신경망의 학습에 가장 적합합니다<sup> 2,7,8,9</sup>. 우리는 여기서 비교적 새로운 naphthylstyryl – pyridinium 염색 (DI – 4 – ANEPPDHQ)의 사용을 보여주는 것입니다<sup> 3</sup> 매우 낮은 phototoxicity, 국제화의 속도가 느린 속도와 뛰어난 화학적 안정성 등 이전을 통해 여러 장점을 제공. 하위 밀리초 시간 해상도를 허용 카메라와 함께 사용할 경우,이 염료는 우리 100X 확대 ~ 2.5 μm의의 최대한의 공간 해상도로 볼 수의 분야에있는 모든 뉴런의 전기 활동을 모니터할 수 있습니다. 낮은 배율 (10X 또는 20X)에서, 단일 셀 해상도의 희생은 남북 ganglionic 회로의 복잡한를 공개, 관점의 증가에 의해 보상됩니다.
이 프로토콜은 두 가지 목표를 염두에두고 작성되었습니다. 첫 번째는 지난 10의 다양한 기술 발전, 전압에 민감한 염료를 사용하는 전기 활동의 광학 녹음 덕분에 그대로의 연결 네트워크를 공부에 대해 가장 강력하고, 안정적이고 저렴한 방법 중 하나가 있으며, 다른 조사를 설득하는 것입니다, 정말 그것은 쉽게 겸손한 자원을 가지고 실험실에서도 구현할 수 있습니다. 두 번째 목표는 두 가지?…
우리는 우리와 함께 자신의 기술 전문 지식을 공유에 대한 2 광자 영상의 시작 부분에 표시되는 이미지, H. 다카노를 얻기위한 자신의 2 광자 현미경을 사용하는 허용을위한 검찰 쿨터 (들어온다) 감사드립니다.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Medium 199 | Sigma, St. Louis, MO | M3769 | With Earle’s salts Without L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Bicarbonate | |
Sylgard | Dow Corning Corp., Midland, MI | 184 silicone elastomer kit | ||
Insect pins used for dissection | F.S.T., Foster City, CA | 26001-30 | ||
Dumont forceps | F.S.T., Foster City, CA | 11203-23 or 11200-33 | ||
Moria MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors | F.S.T., Foster City, CA | 15371-92 | ||
Pins to hold the tissue during the experiment | Seirin Corp., Shizuoka, Japan | Seirin Spinex | ||
Collagenase VII | Sigma, St. Louis, MO | C0773 | ||
Protease IX | Sigma, St. Louis, MO | P6141 | ||
Fetal Bovine Serum | Invitrogen, Carlsbad, CA | 10439-016 | ||
PenStrep | GIBCO, BRL | 15140 | ||
L-Glutamine 100X | GIBCO, BRL | 25030 | ||
Nifedipine | Sigma, St. Louis, MO | |||
Di-4-ANEPPDHQ | Molecular Probes, Eugene, OR | D36802 | ||
4-Channel Stimulus Generator | Multi Channel System MCS GmbH, Reutlingen, Germany | 2000 Series | ||
Peristaltic pump | Rainin, Woburn, MA | 2-channel Dinamax RP-1 | ||
High-speed camera | RedShirtImaging, LLC Decatur, GA | NeuroCCD-SM | ||
1:10 demagnifier / relay lens | Optem, Qioptiq Linos, Inc., Rochester, NY | |||
Upright microscope | Olympus Optical Co., Tokyo, Japan | BX61TRF | ||
Gibraltar fixed stage with motorized X-Y translator | Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada | PSSG–BX2 | ||
Linear matrix electrodes | FHC, Inc., Bowdoin, ME | Custom made | ||
Active vibration-isolation table | Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA | Micro 60 | ||
Ultra-low-ripple feedback stabilized power supply | Kepco, Flushing, NY | ATE 75-15M | ||
Heat filter | Schott Optical Glass, Duryea, PA | KG-1 | ||
High-Q interference filter | Chroma, Inc., Rockingham, VT | HQ530/50 | ||
Dichroic mirror | Chroma, Inc., Rockingham, VT | 565 nm (50% transmission) | ||
Long-pass filter | Chroma, Inc., Rockingham, VT | HQ572LP | ||
Acoustic curtains | Acoustical Surfaces, Inc. | BSC-25 | ||
Neuroplex | RedShirtImaging, Inc., Decatur, GA | |||
IDL | ITT Visual Information Solutions, Boulder, CO | |||
High-resolution CCD camera, with its own camera controller | Hamamatsu Photonics, KK, Hamamatsu City, Japan | |||
Frame-grabber for high-resolution camera | Data Translation, Marlboro, MA | DT3120K-1 | ||
Imaging software for high-resolution camera | Data Translation, Marlboro, MA | Global Lab Image/2 |