Een microfluïdische eilandje perifusion apparaat werd ontwikkeld voor de beoordeling van dynamische insuline secretie van verschillende eilandjes en gelijktijdige fluorescentie beeldvorming van calcium influx en mitochondriale potentiële veranderingen.
Abstract
Een microfluïdische eilandje perifusion apparaat werd ontwikkeld voor de beoordeling van dynamische insuline secretie van verschillende eilandjes en gelijktijdige fluorescentie beeldvorming van calcium influx en mitochondriale potentiële veranderingen. Het apparaat bestaat uit drie lagen: eerste laag bevat een array van microschaal putten (500 micrometer diameter en 150 micrometer diepte) die helpen om de eilandjes te immobiliseren, terwijl blootgesteld te stromen en het maximaliseren van het blootgestelde oppervlak van de eilandjes, de tweede laag bevat een cirkelvormige perifusion kamer (3 mm diep, 7 mm diameter), en de derde laag bevat een inlaat-mixing kanaal dat fans voor injectie in de perifusion kamer (2 mm in de breedte, 19 mm in lengte en 500 micrometer lengte) voor het optimaliseren van het mengen efficiency voorafgaand aan het invoeren van de perifusion kamer. De oprichting van verschillende glucose gradiënten waaronder een lineaire, klokvorm, en vierkante vormen kunnen ook worden gecreëerd in de microfluïdische perifusion netwerk en is aangetoond.
Protocol
A. microfabricage van 3-laags microfluïdische perifusion apparaat Bottom Well Master Protocol (150 um diepe putten) Reinig de wafer met behulp van een scheermesje, indien nodig. Reinigen met aceton, methanol, en het IPA. Voer plasma behandeling bij 50 Watt voor 30 s. Spin SU8-100 @ 2000 tpm. [Stap 1: 500 rpm, 10 s, 100 rpm / s, Stap 2: 2000 rpm, 30 s, 300 rpm / s]. [NB: doen de wafer niet vast met een pincet na het spinnen SU8] Zachte bak de wafer bij 65 ?…
Discussion
Traditionele eilandje perifusion systemen (macroschaal en microschaal) hebben een aantal beperkingen, met inbegrip complex van opzet en ontwerp, een hoge technische eisen, en de moeite om door de gebruiker voorgeschreven chemische gradiënten te creëren in het systeem. De microfluïdische perifusion systeem hier beschreven overwint deze beperkingen met eenvoudige geometrie van ontwerp en fabricage. Nog belangrijker, kan dit systeem worden geïntegreerd met fluorescentie imaging benadering bepalen dat als een uniek inst…
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door AAUW internationale gemeenschap om Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) naar Jose Oberholzer, en The Chicago Diabetes Project.
Adewola, A. F., Wang, Y., Harvat, T., Eddington, D. T., Lee, D., Oberholzer, J. A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device. J. Vis. Exp. (35), e1649, doi:10.3791/1649 (2010).