一个多参数的胰岛内的微流控Perifusion装置Perifusion系统
Summary
一个微流体胰岛perifusion装置，开发了多个小岛和钙离子内流和线粒体的潜在变化的同步荧光成像的动态胰岛素分泌的评估。
Abstract
一个微流体胰岛perifusion装置，开发了多个小岛和钙离子内流和线粒体的潜在变化的同步荧光成像的动态胰岛素分泌的评估。该装置由三个层次：第一层包含一个微型井（直径为500微米和150微米的深度），帮助固定的小岛，而暴露流量和胰岛暴露的表面积最大化的数组，第二层包含循环perifusion室（3毫米深，直径7毫米）;和第三层包含一个入口，混合通道，球迷前注入perifusion室（2毫米宽，19毫米的长度，高度在500微米）优化混合效率之前进入perifusion室。创造各种糖梯度，包括线性，钟形，方形，也可以在微流体perifusion网络，是证明。
Protocol
A. 3层的微流体perifusion装置微细底部井主协议（150微米深水井） 如果需要使用刀片清洁晶圆。与丙酮，甲醇，异丙醇清洁。执行为30秒50瓦的血浆治疗自旋SU8 – 100 @ 2000转。 [步骤1：500 RPM，10秒，100转/秒，第2步：2000转，30秒，300转/ S]。 [注：不与晶圆镊子后纺SU8] 软烤晶圆在65 ° C为20分钟和95 ° C为50分钟。 晶圆被暴露在紫外线下，通过所需的面?…
Discussion
传统的胰岛perifusion系统（宏观和微观）有一定的限制设置和设计，技术要求高，难度在系统中创建的用户指定的化学梯度的复杂。这里描述的微流体perifusion系统克服了这些限制，简单的几何设计和制造。更重要的是，这个系统可以集成与荧光成像方法，提供一个独特的工具来研究胰岛生理。证明该系统具有高信噪比和这些荧光信号的时空分辨率。目前的原型设备，也可以在一个芯片上容纳多个pe…
Acknowledgements
这项工作得到了国际奖学金AAUW Adeola Adewola，美国国立卫生研究院/何塞Oberholzer NCRR（U42RR023245），和芝加哥糖尿病项目。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Riferimenti
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
Citazione di questo articolo
Adewola, A. F., Wang, Y., Harvat, T., Eddington, D. T., Lee, D., Oberholzer, J. A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device. J. Vis. Exp. (35), e1649, doi:10.3791/1649 (2010).